การพัฒนาวิธีวิเคราะห์ปริมาณ Astragalin ในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุมด้วยวิธีโครมาโทกราฟีชนิดผิวบางสมรรถนะสูง -
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
บทนำและวัตถุประสงค์: Astragalin เป็นสารกลุ่มฟลาโวนอยด์ พบในใบมะรุม (Drumstick tree, Moringa oleifera Lam. วงศ์ Moringaceae) มีฤทธิ์ทางชีวภาพหลากหลาย เช่น ต้านอักเสบ ต้านออกซิเดชัน และลดน้ำตาลในเลือด มีการนำสมุนไพรนี้มาใช้ประโยชน์ทั้งทางยาและผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพ แต่ยังไม่มีการกำหนดปริมาณสารสำคัญของสมุนไพรชนิดนี้ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีวิเคราะห์ปริมาณ astragalin ในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุมด้วยเทคนิคโครมาโทกราฟีชนิดผิวบางสมรรถนะสูง (High-performance thin layer chromatography: HPTLC) เพื่อใช้เป็นแนวทางในการควบคุมคุณภาพสารสกัดเอทานอลในใบมะรุม
วิธีการศึกษา: พัฒนาวิธีวิเคราะห์ และทดสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์เชิงปริมาณของสาร Astragalin ในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุม โดยชั่งตัวอย่างสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุม 100 มิลลิกรัม มาละลายในเมทานอลปริมาตร 25.0 มิลลิลิตร นำสารละลายตัวอย่างที่ได้ ปริมาตร 1 ไมโครลิตร มาสปอตลงบนแผ่น HPTLC ซึ่งฉาบด้วยซิลิกาเจล จีเอฟ 254 นาโนเมตรด้วยเครื่องพ่นสารอัตโนมัติ (autosampler) โดยมีวัฏภาคเคลื่อนที่ประกอบด้วย เอทิลอะซีเตท กรดเกลเชียลแอซีติก กรดฟอร์มิกและน้ำ อัตราส่วน 20: 1: 1: 2 นำมาตรวจสอบภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตที่ความยาวคลื่น 366 นาโนเมตร หลังฉีดพ่นด้วยสารละลาย NP/PEG แล้วนำมาวิเคราะห์เชิงปริมาณด้วยเครื่องเดนซิโทมิเตอร์ (densitometer)
ผลการศึกษา: ผลการทดสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์ดังกล่าว พบว่ากราฟมาตรฐานของ astragalin มีความเป็นเส้นตรงในช่วงความเข้มข้น 1.96-11.76 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร โดยมีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (r) เท่ากับ 0.9996 ค่าความแม่นยำ astragalin อยู่ในช่วงร้อยละ 97.75-99.49 ค่าความเที่ยงอยู่ในช่วงร้อยละ 0.22-0.45 มีขีดจำกัดของการตรวจพบและขีดจำกัดของการวัดเชิงปริมาณ เท่ากับ 0.313 และ 1.045 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ เมื่อศึกษาปริมาณ astragalin ในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุมจำนวน 12 ตัวอย่าง พบว่ามีปริมาณสารดังกล่าวร้อยละ 0.06 โดยน้ำหนักของสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุม (ไมโครกรัม/ไมโครกรัม)
อภิปรายผล: วิธีวิเคราะห์ที่พัฒนาขึ้นมาใหม่ รวดเร็วเนื่องจากสามารถสังเกตผลได้พร้อมกันหลายตัวอย่างในเวลาเดียวกัน ประหยัดเนื่องจากแผ่น HPTLC ที่ใช้เป็นวัฏภาคคงที่มีราคาถูกกว่าเมื่อเทียบกับคอลัมน์ HPLC เป็นมิตรต่อสิ่งแวดล้อมและมีความปลอดภัย เนื่องจากใช้วัฏภาคเคลื่อนที่ปริมาณน้อยกว่า นอกจากนี้ พบว่า สัดส่วนของวัฏภาคเคลื่อนที่ในวิธีที่พัฒนาขึ้น มีการใช้กรดลดลงเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีที่เคยมีรายงานมาก่อน ดังนั้นจึงใช้เทคนิคโครมาโทกราฟีชนิดผิวบางสมรรถนะสูงมาใช้ในการพัฒนาวิธีวิเคราะห์ปริมาณ astragalin ในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุม
ข้อสรุป: วิธีวิเคราะห์ที่พัฒนาขึ้นนี้มีความเหมาะสม สามารถนำไปใช้เป็นวิธีตรวจวิเคราะห์ปริมาณastragalin ในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุมและสามารถนำไปสู่การกำหนดเกณฑ์ปริมาณสารสำคัญในสารสกัดเอทานอลจากใบมะรุมต่อไป
Article Details
อนุญาตภายใต้เงื่อนไข Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
เอกสารอ้างอิง
Office of Forest Herbarium, Forest and Plant Conservation Research Office, Department of National Parks, Wildlife and Plant Conservation. Tem Smitinand’s Thai plant names. Bangkok: Prachachon Co., Ltd.; 2001. p.366. (in Thai)
Chayamarit C. Key characters of plant families. Bangkok: Agricultural Cooperative Printing Federation of Thailand Co., Ltd; 2005. (in Thai)
Lianli L, Olson ME. Moringaceae. In Raven PH, AlShehbaz I, Zhu G. Flora of China. Missouri: Botanical Garden Press; 2001;8:196.
Supaporn P, Supap S, Usanee V, Kanokporn S. Antiproliferative effect of Moringa oleifera Lam. and Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk extracts on the colon cancer cells. Journal of Medicinal Plants Research. 2012;6(1):139-45.
Vongsak B, Sithisarn P, Gritsanapan W. Simultaneous HPLC quantitative analysis of active compounds in leaves of Moringa oleifera Lam. Journal of Chromatographic Science. 2014;52(7):641-5.
Auayporn A, Perayot P, Nopparat N, Penpun W. Effect of Moringa oleifera ethanolic leaf extract on VEGF expression in colon cancer (HT 29) cells. This research is financially supported by Silpakorn University Research and Development Institute. Faculty of Pharmacy, Silpakorn University; 2016.
Nakatani N, Kayano S, Kikuzaki H, Sumino K, Katagiri K, Mitani T. Identification, quantitative determination, and antioxidative activities of chlorogenic acid isomer in prune (Prunus domestica L.). Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2000;48(11):5512-6.
Rodriguez de Sotillo DV, Hadley M. Chlorogenic acid modifies plasma and liver concentrations of cholesterol, triacylglycerol, and minerals in (fa/fa) Zucker rats. Journal of Nutritional Biochemistry. 2002;13(12):717-26.
Zhang X, Huang H, Yang T, Ye Y, Shan J, Yin Z. Chlorogenic acid protects mice against lipopolysaccharide-induced acute lung injury. Injury. 2010;41(7):746-52.
Cho AS, Jeon SM, Kim MJ, Yeo J, Seo KI, Choi MS. Chlorogenic acid exhibits anti-obesity and improves lipid metabolism in high-fat diet-induced-obese mice. Food and Chemical Toxicology. 2010;48(3):937-43.
Kotani M, Matsumoto M, Fujita A, Higa S, Wang W, Suemura M. Persimmon leaf extract and astragalin inhibit development of dermatitis and IgE elevation in NC/Nga mice. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2000; 106(1): 159-66.
Soromou LW, Chen N, Jiang L, Huo M, Wei M, Chu X. Astragalin attenuates lipopolysaccharide-induced inflammatory responses by down-regulating NF-kappaB signaling pathway. Biochemical and Biophysical Research Communications 2012; 419(2): 256-61.
Wongsinkongman P, Thongchin T, Shuayprom A, Ontong S, Niumsakul S, Thongsrirak P. Physico-Chemical Properties of Moringa oleifera Lam. Dried Leaves. Journal of Thai Traditional and Alternative Medicine. 2019;17(2):168-80. (in Thai)
Jansakul C, Srichanbarn A, Saelee A. Some pharmacological studies of a hypotensive fraction from Derris scandens. Journal of the Science Society of Thailand. 1997;23:323-34.
Department of Medical Sciences. A practical guide for single laboratory method validation of chemical methods. Nonthaburi: Department of Medical Sciences; 2006. (in Thai)
