การพัฒนาวิธี Multiplex PCR จากโคโลนีเพื่อแยกเชื้อ Streptococcus suis serotype 2 ออกจาก serotype 1/2

บทคัดย่อ

Streptococcus suis (S. suis) เป็นเชื้อแบคทีเรียก่อโรคจากสัตว์สู่คนที่กลับมาระบาดใหม่ โดยแบคทีเรียชนิดนี้ก่อให้เกิดพยาธิสภาพหลายระบบของร่างกายเช่น เยื่อหุ้มสมองอักเสบ ภาวะโลหิตเป็นพิษ เยื่อบุหัวใจอักเสบ โรคปอดบวม กระทั่งการเสียชีวิต ปัจจุบันวิธีการแยกสายพันธุ์โดยใช้ความแตกต่างระดับโมเลกุลไม่สามารถแยกความแตกต่างของ S. suis serotype 2  จาก serotype 1/2 เนื่องจากยีน cps ของ serotypes ทั้งสองมีลำดับเบสที่คล้ายกันมาก ดังนั้นงานวิจัยนี้ได้พัฒนาวิธี multiplex PCR จากโคโลนีของเชื้อโดยตรง ซึ่งไพรเมอร์ที่ใช้ได้รับการออกแบบให้ครอบคลุมส่วนที่มีการเปลี่ยนแปลงลำดับสารพันธุกรรมในตำแหน่งระหว่างยีน cpsS และ cpsT ร่วมกับไพรเมอร์ที่ได้รับการตีพิมพ์แล้วเพื่อใช้แยก S. suis serotype 2  ออกจาก serotype ½  ผลการวิจัยชี้ให้เห็นว่าวิธี multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นสามารถแยกความแตกต่างระหว่าง serotypes ของเชื้อมาตรฐานทั้งสองได้ และมีความจำเพาะต่อ S. suis  โดยไม่พบผลิตผลของ PCR เมื่อทดสอบกับแบคทีเรียแกรมบวกและแกรมลบชนิดอื่นๆ พบเฉพาะผลิตผลของ PCR ที่เกิดจากชุดไพรเมอร์ควบคุมเท่านั้น นอกจากนี้วิธี multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นสามารถตรวจ S. suis ได้จำนวนอย่างน้อย 100 CFU จึงอาจสรุปได้ว่าวิธี multiplex PCR ที่พัฒนาขึ้นสามารถแยก serotype 2 ออกจาก serotype 1/2 ได้ นอกจากนี้เทคนิคที่ได้พัฒนาขึ้นมีความไว ความจำเพาะ เป็นวิธีที่ง่าย และประหยัด อย่างไรก็ตามก่อนนำวิธีดังกล่าวไปใช้ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาคลินิกหรือในการศึกษาทางระบาดวิทยา ควรทดสอบเพิ่มเติมกับเชื้อ S. suis serotype อื่นๆ หรือแบคทีเรียสายพันธุ์อื่นที่ใกล้เคียงเพิ่มเติม