การศึกษาเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเซลล์ไลน์สำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน แบบส่องกราด ด้วยการใช้เฮกซาเมทิลไดซิลาเซน
DOI:
https://doi.org/10.14456/jmu.2025.20คำสำคัญ:
การทำแห้ง, เซลล์ไลน์, กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด, เฮกซาเมทิลไดซิลาเซนบทคัดย่อ
ศูนย์เครื่องมือวิทยาศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ สถาบันเทคโนโลยีพระจอมเกล้าเจ้าคุณทหารลาดกระบัง มีห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเซลล์สัตว์ ที่ให้บริการปลูกเซลล์ไลน์บนชิ้นงานวัสดุต่าง ๆ และมีผู้ใช้บริการจำนวนมากที่มีความต้องการศึกษาลักษณะทางกายภาพของเซลล์ไลน์ด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด จึงได้ทำการศึกษาเทคนิคการเตรียมตัวอย่างเซลล์ไลน์ปกติจากไตลิง (Vero) และเซลล์ไลน์มะเร็งเยื่อบุช่องปากและกระพุ้งแก้มมนุษย์ (KB) โดยการทำแห้งตัวอย่างด้วยการแช่ตัวอย่างเซลล์ไลน์ในสารเฮกซาเมทิลไดซิลาเซน (HMDS) ที่ความเข้มข้นร้อยละ 50, 70 และ 100 ที่เวลา 3, 5 และ 10 นาที เปรียบเทียบกับเครื่องทำแห้ง ณ จุดวิกฤต (CPD) นับจำนวนเซลล์เดี่ยวและกลุ่มเซลล์ที่มีลักษณะสมบูรณ์ มีลักษณะแบนเพียงเล็กน้อย
ผลการทดสอบพบว่า การแช่ตัวอย่างเซลล์ไลน์ในสาร HMDS ที่ความเข้มข้นร้อยละ 100 เป็นระยะเวลา 3 นาที เป็นสภาวะที่ดีที่สุด โดยเซลล์ไลน์ Vero และ KB มีลักษณะทางกายภาพที่สมบูรณ์ร้อยละ 84.73 และ 92.45 ตามลำดับ เปรียบเทียบกับเครื่อง CPD พบว่า เซลล์ไลน์ Vero และ KB มีลักษณะทางกายภาพที่สมบูรณ์ร้อยละ 85.23 และ 92.38 ตามลำดับ ซึ่งไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับความเชื่อมั่นร้อยละ 95
จึงสรุปได้ว่าการทำแห้งตัวอย่างด้วยสาร HMDS มีคุณภาพเทียบเท่ากับการทำแห้งด้วยเครื่อง CPD และจากวิธีการนี้ยืนยันได้ว่าสามารถเตรียมตัวอย่างเซลล์ไลน์ Vero และ KB สำหรับการถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราดได้
เอกสารอ้างอิง
Ali, R., El-Boubbou, K. & Boudjelal, M. (2021). An easy, fast and inexpensive method of preparing a biological specimen for scanning electron microscopy (SEM). MethodsX, 8, 1-8. https://doi.org/10.1016/j.mex.2021.101521
Bianca, P. S., Fernanda, N., Camila, P. F., Ricardo, M. S., Adriana, F. S., Flavio, F. D., Neftali, L. V. C. (2015). Comparing different methods to fix and to dehydrate cells on alginate hydrogel scaffolds using scanning electron microscopy. Microscopy Research and Technique, 78(7), 553-561. https://doi.org/10.1002/jemt.22508
Breat, F., Zanger, R. & Wisse, E. (1997). Drying cells for SEM, AFM and TEM by Hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. Journal of Microscopy, 168(1), 84-87.
Hazrin-Chong, N. H., & Manefield, M. (2012). Corrigendum to An alternative SEM drying method using hexamethyldisilazane (HMDS) for microbial cell attachment studies on sub-bituminous coal. Journal of Microbiological Methods, 90(2), 96-99. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2012.04.014
Jusman, Y., Ng, S. C., & Osman, N. A. A., (2014). Investigation of CPD and HMDS Sample Preparation Techniques for Cervical Cells in Developing Computer-Aided Screening System Based on FE-SEM/EDX. The Scientific World Journal, 13(1), 124-135.
Lee, J., T., Y. & Chow, K. L. (2012). SEM Sample Preparation for Cells on 3D Scaffolds by Freeze-Drying and HMDS. Wiley Online Library, 34(1), 12-25. https://doi.org/10.1002/sca.20271
Nikara, S., Ahmadi, E. & Nia, A., A. (2020). Effects of different preparation techniques on the microstructural features of biological materials for scanning electron microscopy. Journal of Agriculture and Food Research, 2, 361-368.
ดาวน์โหลด
เผยแพร่แล้ว
ฉบับ
ประเภทบทความ
สัญญาอนุญาต
ลิขสิทธิ์ (c) 2025 Mahidol R2R e-Journal
อนุญาตภายใต้เงื่อนไข Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
