การพัฒนาการผลิตทรอมบินของมนุษย์ของศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทย

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ

บทนำ ทรอมบินของมนุษย์ ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในผลิตภัณฑ์ห้ามเลือด และถือเป็นส่วนประกอบในตัวยาออกฤทธิ์ที่สำคัญของกาวไฟบริน ซึ่งถูกนำมาใช้ในทางคลินิกสำหรับการผ่าตัด เช่น ศัลยกรรมช่องปากและหัวใจ โดยศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทย ได้เริ่มผลิตกาวไฟบรินตั้งแต่ปี พ.ศ. 2540 โดยใช้ทรอมบินที่นำเข้าจากต่างประเทศซึ่งภายหลังผู้ผลิตจากต่างประเทศได้เลิกจำหน่าย จึงทำให้ต้องหยุดผลิตกาวไฟบรินในปี พ.ศ. 2553 ศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติจึงมีแนวคิดในการพัฒนาการผลิตทรอมบินจากมนุษย์ขึ้นใช้เองในประเทศ โดยเริ่มจากการสกัดทรอมบินจากพลาสมาในระยะที่ 1 ช่วงปี พ.ศ. 2559-2563 เพื่อให้เกิดประโยชน์สูงสุดในการนำโปรตีนที่มีอยู่ในพลาสมามาใช้ในการรักษาผู้ป่วย วัตถุประสงค์ การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนากระบวนการผลิตทรอมบินจากพลาสมา ณ ศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทย แทนการสั่งซื้อจากต่างประเทศซึ่งมีราคาแพง  วัสดุและวิธีการ การผลิตทรอมบินเริ่มต้นด้วยการแยกโปรทรอมบินคอมเพล็กซ์ (PTC) โดยพลาสมาที่ผ่านการแยก cryoprecipitate ออก ถูกนำไปผ่านเรซิน DEAE Sephadex และทำการล้างเพื่อให้ได้ PTC ขั้นต้น ก่อนเปลี่ยน PTC เป็นทรอมบินโดยใช้ไกลซีน แคลเซียมคลอไรด์ และควบคุมค่า pH การนำไปผ่านสารละลายและสารชะล้าง (SD) ถูกดำเนินการเพื่อความปลอดภัยจากไวรัส ก่อนทำการแยกทรอมบินบริสุทธิ์ด้วยคอลัมน์โครมาโทกราฟี SP Sephadex และการกรองระดับนาโน ทรอมบินและโปรทรอมบินที่บริสุทธิ์ถูกวิเคราะห์หาค่าความแรงและความบริสุทธิ์โดยใช้การทดสอบการแข็งตัวของเลือด สเปกโตรโฟโตเมตรี โครมาโทกราฟีแบบแก๊ส และ SDS-PAGE  ผลการศึกษา การผลิตทรอมบินจากพลาสมาขนาด 20 ลิตร 3 ชุด ให้ค่าความแรงทรอมบินที่ 12,665, 11,143 และ 12,727 IU/mL โดยมีค่าความแรงจำเพาะที่ 1,550, 1,450 และ 1,509 IU/mg ตามลำดับ ปริมาณสาร SD ที่เหลือตกค้าง พบว่าสองรุ่นการผลิต มีค่าอยู่ในเกณฑ์ที่ยอมรับได้ และ SDS-PAGE ไม่พบแถบโปรตีนอื่น ๆ หลังการทำให้บริสุทธิ์ การเพิ่มขนาดการผลิตเป็น 40 ลิตรสำหรับ 2 รุ่นการผลิต ให้ผลลัพธ์ที่สอดคล้องกับขนาดการผลิต 20 ลิตรในแง่ของค่าความแรงทรอมบิน ค่าความแรงจำเพาะ และปริมาณสาร SD ที่เหลือตกค้าง  สรุป ศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทยได้พัฒนาการผลิตทรอมบินจากพลาสมาที่สามารถขยายขนาดการผลิตได้ โดยสอดคล้องตามเกณฑ์คุณภาพมาตรฐานที่จะนำไปประยุกต์ใช้ทางการแพทย์และการวิจัยได้