การวินิจฉัยก่อนคลอดของไรค Homozygous B-Thalassemia โดยการวิเคราะห์ชนิดของ Fetal Hb ด้วย Automated HPLC
คำสำคัญ:
PND, Homozygous B-thalassemia, Fetal Hb typing, HPLCบทคัดย่อ
ความเป็นมา: การวินิจฉัยก่อนคลอดเป็นวิธีหนึ่งที่สามารถควบคุมและป้องกันการเกิดโรค homorygous B-thalassemia ได้วิธีที่นิยมใช้กันในปัจจุบัน คือ การตรวจ DNA จาก chorionic villi หรือ amniocytes จาก amniotic fluid แต่วิธีดังกล่าวมีขั้นตอนที่ยุ่งยาก และต้องลงทนสูง และ B-thalassemia gene ที่พบในประเทศศศส่วนใหญ่เป็น B-thalassemia gene เมื่อมารวมกันก่อให้เกิดโรค homozygous B-thalassemia ชนิดร้ายแรง และไม่มีการสร้าง HD A ดังนั้น การตรวจวัดสัดส่วนของ Hb A ในฟิตัสด้วยวิธี automated HPLC จะเป็นอีกทงเลือกหนึ่งของการวินิจฉัยก่อนคลอดได้ วัสตุและวิธีการ: เลือด
ตัวอย่างของพี่ตัส 40 ราย อายุ 18-22 สัปดาห์ ได้จากการทำ cordocentesis ของหญิงหญิงฝากครรภ์ที่ได้รับการตรวจกรองแล้ว และเสียงที่จะให้บุตรเป็นโรค bomozygous B-thalassemia นำไปตรวจวิเคราะห์ชนิดของ Hb ด้วย automated HPLC และตรวจหา B-globin gene mutation โดย25 direct B-globin gene sequencing ผลการศึกษา: การวิเคราะห์ชนิดของ Hb ด้วย automated HPLC พบฟิตัส 9 ราย ไม่มีสัดส่วนของ Hb A และ Hb A. มีแต่ Hb F และอีก 31 รายพบสัดส่วน ของ Hb A ตั้ง แต่ 0.5-7.4% ที่เหลือเป็น Hb F และไม่พบสัดส่วนของ Hb A2 เช่นกัน ผลการตรวจ DNA sequencing ของฟิตัส 9 ราย ที่ไม่พบสัดส่วนของ Hb A เป็น homozygote ของ 4 bp deletion ที่ codon 41/42 (-CTTT) 2 ราย compound heterozygote ของ nonsense mutation ที่ codon 17 (A-T) กับ 4 bp deletion ที่ codon 41/42 (-CTTT) 4 ราย homozygote ของ splice site mutation ที่ IVS 1nt 1 (G-T) 2 ราย และเป็น compound heterozygote ของ nonsense mutation 1 codon 35 (C-A) กับ 4 bp deletion codon 41/42(-CTTT) อีก 1 ราย พิตัสที่มี Hb A 1 ราย มีค่าสัดส่วนของ Hb A เท่ากับ 0.5% พบเป็น compound beterozygote ของ 4 bp deletion ที่ codon 41/42 (-CTTT) กับ promoter mutation ที่ -28 (A-G), 20 ราย มีค่าสัดส่วนของ Hb A อยู่ระหว่าง 0.8-28% (1.82+049) พบเป็น B-thalassemia trait 164 4 bp deletion 12 The nonsense 17 mutation (A-7) 1 ราย IVSint1 (G-T) 3 ราย nonsemutation ที codon 35 (C-A) 2 ราย use promoter mutation ที่ 28 (A-G) 2 ราย ที่เหลืออีก 10 ราย มีค่า Hb A อยู่ระหว่าง 29-7.4% (4.9+1.47) และไพบ B-thalassemia mutatation วิจารณ์และสรป: การวินิจฉัยก่อนคลอดด้วย วิธีวิเคราะห์ชนิดของ Hb ด้วย automated HPLC พบว่า homozygous B-thalassemia มีลักษณstนะ chromatogram ที่จำเพาะคือ ไม่มีสัดส่วนของ Hb A และ ต่างจาก chromatogram ของฟิตัสที่เป็น B'-thalassemia, B-thalassemia trait และฟีตัสปกติชัดเจนและให้ผลลอดคล้องกับการตรวจ genotybe โดยวิธี DNA sequencing วิธีการวิเคราะห์ fetal Hb ไม่ยุ่งยากมีความแม่นยำสูงเหมาะที่จะใช้เป็นวิธีวินิจฉัยก่อนคลอดสำหรับหญิงตั้งครรภ์ในโครงการ การควบคุมและป้องกันการเกิดโรค homozygous B-thalassemia ชนิดร้ายแรงได้
Downloads
เอกสารอ้างอิง
ประเวศ วะสี (ร่าง) แผนงานธาลัสซีเมียแห่งชาติ มูลนิธโลหิตจางธาลัสซีเมียแห่งประเทศไทย พฤษภาคม 2539
Modell B. Total management of thalassemia major. Arch Dis Child 1997;52:487-500.
Porter JB. Excerpta Haematologica. Current strategies and perspectives in thalassemia treatment. Novartis Pharma Verlag. 90327 Nurnberg, Germany, 1999.
Winichagoon P, Fucharoen S, Siritanaratkuln, et al. Prenatal diagnosis for bata-thalassemia syndromes using HPR-labeled oligonucleotides probes at Siriraj Hospital. Southeast Asian J Trop Med Public Health 1995;16(suppl 1):282-6.
Winichagoon P, Saechan V, Sripanich R, et al. Prenatal diagnosis of beta-thalassemia by reverse dot blot hybridization. Prenat Diagn 1999:428-35-35.
Muralitharan S, Srivastava A, Shaji RV, et al. Prenatal diagnosis of beta-thalassemia mutations using the reverse dot blot technique. Nat Med J India 1996;9:70-1.
Chiou SS, Lin TC, Chang TT, et al. Prenatal and molecular diagnosis of beta-thalassemia major in Taiwan by naturally amplified created restriction sites. Int J Hematol 1993;59:1-8.
Laosombat V, Nopparat C, et al. Molecular basis of beta thalassemia in Thailand. Sigapore Paediatr J 1995;37:148-52.
Laig M, Sanguansermsri T, et al. The spectrum of beta-thalassemia mutations in northern and northeastern Thailand. Hum Gen 1988;84;47-50.
Sanguansermsri T, Chayutimulkul L. Globin synthesis in beta-thalassemic patients. J Med Ass Thai 1978;61:50-1.
Sanguansermsri T, Phumyu N, Chomchuen S, et al. Screening for Ot-thalassemia-1 heterozygotes in expecting couples by the combination of a simple erythrocyte osmotic fragility test and a PCR based method. Community Genetics 19999:26-9.
Sanguansermsri T, Tanpaiboon P, Wongmaeta S, et al. A2 test: A simple method for the screening of severe B-thalassemia trait. ThaiJ Hematol Transf Med 1999 (in press).
VARIANTTM Beta-Thalassemia Short Progam Instruction Manual. Bio-Rad Diagnostics California, USA, 1994.
Kitsirisakul B, Steger HF, Sanguansemsermsri T. Frequency of Ol-thalassemia-1 of the southeast Asian-type among pregnant women in northern Thailand determined by PCR technique. Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1996;35:362-3.
ABI PRISM" DNA sequencing. Chemistry guides Perkin-Elmer, Foster City CA., USA. 19951-3
Gordkshakar AC, Lulla CP, Nadkarni AH, et al. Prenatal diagnosis of beta-thalassemia among Indians using denaturing gradient gel electrophoresis. Hemoglobin 1997;21:421-35.
Chang J G, Lu JM, Huang JE, et al. Rapid diagnosis of beta-thalassemia by mutagenically separated polymerase chain reaction (MS-PCR) and its application to prenatal diagnosis. Br J Haematol 1995,91.602-7.
XU XM, Ma WF, Song LL, et al. Direct genotyping and prenatal diagnosis of beta-thalassemia in Chinese by plymerase chain reaction mediated restriction fragment length polymorphism method. Clin Biochem 1993;26:497-503.
Trent RJ, Le H, Yu B. Prenatal diagnosis for thalassemia in a multicultural society. Prenat Diagn 1998;18:591-8.
Saxena R, Jain PK, Thomas E, et al. Prenatal diagnosis of beta-thalassemia: experience in a developing country. Prenat Diagn 1998;18:1-7.
Sanguansermsri T, Steger HF, Kongtaveelert P, et al. Prenatal diagnosis of homozygous &-thalassemia-1 by fetal hemoglobin typing with high performance liquid chromatography. Thai J Hematol Transf Med 1999 (in press).
Rao VB, Natrajan PG, Lulla CP, et al Rapid midtrimester prenatal diagnosis of beta-thalassemia and other haemoglobinopathies using a non-radioactive anion exchange HPLC techinique an Indian experience. Prenat Diagn 1997;17:725-31.
Maiavacca R, Tedeschi S, Mosca A, et al. Nonradioactive quantification of low concentrations of hemoglobin A by HPLC for midtimester prenatal diagnosis of beta-thalassemia. Clin Chem 1992;38:1906-8.
Berdoukas V, Argnle J, Cox W, et al. Prenatal diagnosis for hemoglobinopathies - 10 years experience using fetal blood sampling. Pathology
;25:48-51.
ดาวน์โหลด
เผยแพร่แล้ว
ฉบับ
ประเภทบทความ
สัญญาอนุญาต
อนุญาตภายใต้เงื่อนไข Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
