การวิเคราะห์ Chromosome Breakage ที่ชักนำด้วย สาร Diepoxybutane (DEB) เพื่อวินิจฉัย Fanconi Anemia ในคนไทย
คำสำคัญ:
Chromosome breakage, Fanconi anemia, DEBบทคัดย่อ
บทคัดย่อ: การวิจัยนี้ได้ศึกษาการแตกหักของโครโมโซม (chromosome breakage) ที่ชักนำโดยสาร clastogen ในคนไทยปกติ 30 คน และครอบครัวผู้ป่วย Fanconi anemia (FA) 7 ครอบครัว โดยทำการเพาะเลี้ยงเซลล์ลิมโฟไซต์และใช้สาร Diepoxybutane (DEB ชักนำให้เกิดการแตกหักของโครโมโซม ซึ่งสาร DEB ใช้ทดสอบในความเข้มข้นต่างๆ กัน คือ 0 ไม่โครกรัม/มล. (ไม่ใส่ DEB), 0.01, 0.1, 0.2 ไมโครกรัม/มล. สำหรับคนปกติ ส่วนผู้ป่วย FA ใช้
สาร DEB ในความเข้มข้น 0, 0.01, 0.1 ไม่โครกรัม/มล.การเตรียมโครโมโซมทำโดยดัดแปลงวิธีมาตรฐาน การวิเคราะห์ chromosome breakage ใช้ทั้งกล้องจุลทรรศน์ธรรมดา (กำลังขยาย x 100) และเครื่องวิเคราะห์โครโมโซมอัตโนมัติ รุ่น cytovision ซึ่งทำการวิเคราะห์โครโมโชมทั้งหมด 20 เมตาเฟสต่อหนึ่งความเข้มข้นของ DEB ต่อหนึ่งตัวอย่าง รวมจำนวน เมตาเฟสที่ทำการวิเคราะห์ 2400 เมตาเฟส ในกลุ่มคนปกติ และ 1260 เมตาเฟสในกลุ่มครอบครัว FA รวมวิเคราะห์ทั้งหมด 3660 เมตาเฟส ผลการวิเคราะห์โครโมโชมในคนปกติ ไม่พบ chromosome breakage ในทุกๆ ความเข้มข้นของ DEB และในทุกตัวอย่างทดสอบ ส่วนผู้ป่วย FA 7 ครอบครัว พบ chromosome breakage 5 ครอบครัว ไม่พบ chromosome break 2 ครอบครัว ผู้ป่วย FA ที่พบส่วนใหญ่มี chromosome breakage เกิดขึ้นได้ง่ายใน DEB ที่ความเข้มข้น0.1 ไม่โครกรัม/มล. และในความเข้มข้น 0.01 ไม่โครกรัม/มล. หรือไม่มี DEB (spontaneous break) ในผู้ป่วยบางราย ดังนั้นจะเห็นว่าการใช้สาร DEB ในความเข้มข้นมากถึง 0.2 ไมโครกรัม/มล. ไม่สามารถทำให้โครโมโซมของคนปกติเกิดมี breakage ให้เห็นได้ ฉะนั้นจึงสามารถใช้ความเข้มข้นของ DEB ที่ต่ำกว่า คือ 0.1 ไมโครกรัม/มล. เป็นตัวควบคุมลบ (negative control) ได้อย่างมั่นใจ เพราะจะไม่ทำให้เกิด false positive ในกลุ่มคนปกติ ซึ่งแตกต่างจากผู้ป่วย FA ที่ DEB ความเข้มข้นต่ำๆ หรือไม่ใช้ DEB ก็ทำให้เกิดการแตกหักของโครโมโชมได้ การวิเคราะห์chromosome breakage เป็นงานตรจวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการพันธุศาสตร์ที่มีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับยืนยันการวินิจฉัยทางคลินิกในผู้ป่วย FA
Downloads
เอกสารอ้างอิง
Lee GR. Pancytopenia, aplastic anemia and pure red cell aplasia. In: Lee GR, Foerster J, Lukens J, Paraskevas F, Greer PJ, Rodgers MG, eds. Wintrobe's Clinical Hematology, Volume I. 10 ed. Maryland: Williams & Wilkins 1999:1472-3.
Lynn and Dave Frohnmayer. Fanconi anemia: A Handbook for famillies and Their Physicians. 2" ed. Eugene : Fanconi Anemia Research Fund, Inc., 1995.
Connor MJ, Ferguson-Smith AM. Essential medical genetics: Chromosome Aberrations. 3d ed. London: Blackwell Science 1991.
Sum H, Puto HA. Selected mendelian diseases. In : Nora JJ, Fraser FC, eds. Medical Genetics, principle and practice. 3 ed. Philadelphia : Lee & Febiger 1989:167-8.
Fanconi G : Familial constitutional panmyelocytopathy, Fanconi's anemia (FA). I.Clinical aspects. Semin Hematol 1967;4:233.
Joenje H, Patel KJ. The emerging genetic and molecular basis of Fanconi anemia. Natl Rev Genet 2001;2:446-57.
Strathdee CA, Gavish H, Shannon WR, Buchwald M. Cloning of cDNAs for Fanconi's anemia by functional complementation. Nature 19924356:763-7.
Lo Ten Foe JR, et al. Expression cloning of a cDNA for the major Fanconi anemia gene, FAA. Nature Genet 1996;14:320-3.
de Winter JP, et al. Isolation of a cDNA representing the fanconi anemia complementation group E gene. Am J Hum Genet 2000;67:1306-8.
de Winter JP, et al. The Fanconi anemia gene FANCF encodes a novel protein with homology to ROM. Nature Genet 2000;24:15-6.
de Winter JP. The Fanconi anemia group G gene FANCG is identical with XRCC9. Nature Genet 1998:20:281-3.
Howlett NG, Taniquchi T, OIson S, Cox B, Waisfisz de Die-Smulders C, Persky N, Grompe M, Joenje H, Pals G, Ikeda H, Fox EA, D'Andrea AD. Biallelic inactivation of BRCA2 in Fanconi anemia. Science 2002:297:606-9.
D'Andrea AD, Grompe M. The Fanconi anemia/BRCA pathway. Nature Rev (online) 2003;3:23-34. (www.Nature.Com/reviews/cancer)
Whitney MA, Jakobs P, Kaback M, Moses RE, Grompe M. The Ashkenazi Jewish Fanconi anemia mutation: incidence among patients and carrier frequency in the at - risk population. Hum Mutat 1994;3:339-41.
Verlander PC, et al. Carrier frequency of the IVS4 +4A-T mutation of the Fanconi anemia gene FAC in the Ashkenazi Jewish population. Blood 1995,86.4034-8
Gillio AP, Verlander PC, Batish SD, Giampietro PF, Auerbach AD. Phenotypic consequences of mutations in the Fanconi anemia FAC gene : an International Fanconi Anemia Registry study. Blood 1997,90:105-10.
Auerbach AD, Rogatko A, Schroeder-Kurth TM. International Fanconi Anemia Registry : Relation of clinical symptoms to diepoxybutane sensitivity. Blood 1989,73:391.
Auerbach AD. Diagnosis of Fanconi anemia by diepoxybutane analysis. In: Dracopoli NC, Haines JL, Korf BR, Moir DT, Morton CC, Seidman CE, Seidman JG, Smith DR, eds. Current Protocols in Human Genetics: Current Protocols. New York 1994.
Witt E, Ashworth A. D-Day for BRCA2. Science 2002;297:534.
West SC. Cross-links between Fanconi anemia and BRCA2. DNA Repair 20032:231-4.
MarX J. Debate surges over the origins of genomic defects in cancer. Science 2002;297:544-6.
Gregory RC, Taniguchi T, D'Andrea AD. Regulation of the Fanconi anemia pathway by monoubiquitination. Sem Cancer Biol 2003;13:77-82.
Welcsh PL, Owen KN, King MC. Insights into the functions of BRCA1 and BRCA2 (review). TIG 2000;16:69-74.
Billie RB, Fromcis TF. Basic laboratory techniques in cell culture, U.S. Department of Health and Human Services, 1981:123-4.
Gosden CM, Davidson C, Robertson M. Lymphocyte culture. In: Rooney DE, Czepnlkowaki BH, eds. Human Cytogenetics Volume1 Constitutional analysis: A Practical Approach. New York: Oxford University Press, 1992:30-40.
บังอร ตัณฑ์เกยูร, ทัศนีย์ เล็บนาค และกนกนาถ ชูปัญญา. ปฏิบัติการ Cytogenetics ในทางการแพทย์. กรุงเทพฯ: คณะเทคนิคการแพทย์ มหาวิทยาลัยมหิดล, 2527:17-20.
Alter BP. Fanconi's anemia and malignancies. Am J Hematol 1996;53:99-110.
Ishida R, Buchwald M. Susceptibility of Fanconi's anemia lymphoblasts to DNA cross-linking and alkylating agents. Cancer Res 1982;42:4000-6.
Sasaki MS, Tonomura A. A high susceptibility of Fanconi's anemia to chromosome breakage by DNA cross-linking agents. Cancer Res 1973;33:1829-36.
Strathdee CA, Buchwald M. Molecular and cellular biology of Fanconi anemia. Am J Peddiatr Hematol Oncol 1992;14:177-85.
Auerbach AD, Rogatko A, Schroeder-Kurth TM. International Fanconi Anemia Registry: First reportt. In: Schroeder-Kurth T'M, Auerbach AD, Obe G, eds. Fanconi anemia: clinical, cytogenetic, and experimental aspects. Berlin: Springer-Verlag 1989:3-17.
Auerbach AD, Ghosh R, Pollio PC, Zhang M. Diepoxybutane test for prenatal and postnatal diagnosis of Fanconi anemia. In: Schroeder-Kurth T'M, Auerbach AD, Obe G, eds. Fanconi anemia: clinical, cytogenetic, and experimental aspects. Berlin: Springer-Verlag, 1989.71-82.
ดาวน์โหลด
เผยแพร่แล้ว
ฉบับ
ประเภทบทความ
สัญญาอนุญาต
อนุญาตภายใต้เงื่อนไข Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
