Development of in-house real-time polymerase chain reaction for HLA-B locus typing
คำสำคัญ:
เอชแอลเอ-บี, เรียลไทม์ พีซีอาร์บทคัดย่อ
บทคัดย่อ
บทนำ Human leukocyte antigen (HLA) มีความสำคัญในระบบภูมิคุ้มกัน โดยมีหน้าที่นำเสนอเปปไทด์ของแอนติเจนที่แปลกปลอมให้กับ T-cells ยีนHLA มีความหลากหลายในระบบภูมิคุ้มกัน โดยเฉพาะ HLA-B พบว่ามีความหลากหลายมากที่สุด ปัจจุบันมีการตรวจ HLA เพื่อดูยีนที่มีความสัมพันธ์กับการแพ้ยา กับการเกิดโรคบางชนิด และเพื่อการปลูกถ่ายอวัยวะ วิธี real-time polymerase chain reaction (PCR) เป็นวิธีที่นิยมมากขึ้นที่นำมาใช้ในการตรวจ HLA-typing เนื่องจากง่ายต่อการใช้งานและใช้เวลาในการตรวจสั้นกว่าวิธีอื่นๆ ซึ่งวิธีมาตรฐานที่ใช้ในปัจจุบันคือ PCR-sequence specific oligonucleotide (PCR-SSO), PCR-sequence-specific primer (PCR-SSP) และ real-time PCR วัตถุประสงค์ เพื่อพัฒนาชุดตรวจ HLA typing (HLA-B locus) โดยใช้ in-house real-time PCR สำหรับการตรวจในงานประจำและลดค่าใช้จ่ายในการซื้อชุดตรวจจากต่างประเทศ วัสดุและวิธีการ ตัวอย่างตรวจได้จากผู้บริจาคเกล็ดเลือด ที่ทราบผลตรวจ HLA-B แล้ว ในภาควิชาเวชศาสตร์การธนาคารเลือด คณะแพทยศาสตร์ศิริราชพยาบาล มาทำการตรวจด้วยวิธี real-time PCR โดยเตรียม in-house primers ในการตรวจ HLA-B locus ทั้งหมด 22 คู่ โดยตรวจจำนวน 45 ตัวอย่าง และ B*15 ทั้งหมด 5 คู่ โดยตรวจจำนวน 10 ตัวอย่าง ผลการศึกษา การตรวจ HLA-B typing และ HLA-B*15 ด้วยวิธี real-time PCR โดยใช้ in-house primers พบว่าให้ผลบวกตรงตามวิธีที่ใช้ตรวจในงานประจำ สรุป การทำ in-house real-time PCR สำหรับตรวจ HLA B-locus ให้ผลตรวจถูกต้อง รวดเร็ว รวมระยะเวลาในการทำตั้งแต่เตรียมตัวอย่างจนถึงการอ่านผล น้อยกว่าวิธีที่ใช้ในปัจจุบัน รวมถึงต้นทุนต่อการทดสอบเมื่อเทียบกับชุดทดสอบของ real-time PCR จากต่างประเทศพบว่ามีต้นทุนที่ต่ำกว่าสามารถประหยัดค่าใช้จ่ายได้มาก
Downloads
เอกสารอ้างอิง
2. Bodis G, Toth V, Schwarting A. Role of Human Leukocyte Antigens (HLA) in Autoimmune Diseases. Methods Mol Biol. 2018;1802:11-29.
3. Mungall AJ, Palmer SA, Sims SK, Edwards CA, Ashurst JL, Wilming L, et al. The DNA sequence and analysis of human chromosome 6. Nature. 2003;425:805-11.
4. Leen G, Stein JE, Robinson J, Maldonado Torres H, Marsh SGE. The HLA diversity of the Anthony Nolan register. HLA. 2021;97:15-29.
5. Guillaume N. Improved flow cytometry crossmatching in kidney transplantation. HLA. 2018;92(6):375-83.
6. Tupmongkol T, Khanunthong S, Boonpokkrong P, Tatawatorn A, Nathalang O, Attajarusit Y ,et al. Implementation of Real-time PCR for HLA Typing in Deceased Donors. J Hematol Transfus Med. 2017;27:217-24.
7. Dunckley H. HLA typing by SSO and SSP methods. Methods Mol Biol. 2012;882:9-25.
8. Cao K, Chopek M, Fernández-Viña MA. High and intermediate resolution DNA typing systems for class I HLA-A, B, C genes by hybridization with sequence-specific oligonucleotide probes (SSOP). Rev Immunogenet. 1999;1:177-208.
9. Rahal M, Kervaire B, Villard J, Tiercy JM. DNA typing by microbead arrays and PCR-SSP: apparent false-negative or -positive hybridization or amplification signals disclose new HLA-B and -DRB1 alleles. Tissue Antigens. 2008;71:238-41.
10. Welsh K, Bunce M. Molecular typing for the MHC with PCR-SSP. Rev Immunogenet. 1999;1:157-76.
11. Navarro E, Serrano-Heras G, Castaño MJ, Solera J. Real-time PCR detection chemistry. Clin Chim Acta. 2015;439:231-50.
12. Cho EH, Lee SG, Seok JH, Park BY, Lee EH. Evaluation of two commercial HLA-B27 real-time PCR kits. Korean J Lab Med. 2009;29:589-93.
13. Nguyen DV, Vidal C, Chu HC, Do NT, Tran TT, Le HT, et al. Validation of a novel real-time PCR assay for detection of HLA-B*15:02 allele for prevention of carbamazepine - Induced Stevens-Johnson syndrome/Toxic epidermal necrolysis in individuals of Asian ancestry. Hum Immunol. 2016;77:1140-6.
14. Jaruthamsophon K, Sripo T, Sukasem C, Limprasert P. Comparison of a new in-house and three published HLA-B*15:02 screening methods for prevention of Carbamazepine-induced severe drug reactions. PloS one. 2016;11:e0155907.
15. Chen P, Lin JJ, Lu CS, Ong CT, Hsieh PF, Yang CC, et al. Carbamazepine-induced toxic effects and HLA-B*1502 screening in Taiwan. N Engl J Med. 2011;364:1126-33
16. Gierbolini J, Giarratano M, Benbadis SR. Carbamazepine-related antiepileptic drugs for the treatment of epilepsy - a comparative review. Expert Opin Pharmacother. 2016;17:885-8.
17. Liu Y, Yu Y, Nie X, Zhao L, Wang X. Association between HLA-B*15:02 and oxcarbazepine-induced cutaneous adverse reaction: a meta-analysis. Pharmacogenomics. 2018;19:547-52.
18. Barnardo MC, Welsh KI, Vilches C, Maitland K, Bunce M. Allele-specific HLA-B*15 typing by PCR-SSP and its application to four distinct ethnic populations. Tissue Antigens. 1998;51: 293–300.
