การตรวจสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์ Recombinant Human Growth Hormone โดยวิธี HPLC ซึ่งใช้เครื่องตรวจวัด UV และ Fluorescence
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
บทนำ: Recombinant human growth hormone เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้จากเทคโนโลยีชีวภาพ ซึ่งอาจมีความแปรปรวนของขนาดโมเลกุลโปรตีน ความบริสุทธิ์และปริมาณในแต่ละรุ่นการผลิต การควบคุมคุณภาพจึงมีความสำคัญต่อการพิสูจน์เอกลักษณ์ การประเมินประสิทธิภาพ ความปลอดภัยและมาตรฐานของผลิตภัณฑ์ วิธีวิเคราะห์หาปริมาณตามตำรายา คือ HPLC-UV แบบ single point method ซึ่งต้องใช้ปริมาณสารในการวิเคราะห์สูง การวิจัยนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีวิเคราะห์ Growth hormone ที่มีความไว มีประสิทธิภาพและประหยัดค่าใช้จ่าย วิธีดำเนินการวิจัย: ทำการวิเคราะห์สารโดยหลักการ HPLC-size exclusion chromatography (SEC) โดยใช้คอลัมน์ TSKgel G2000SWXL และมีเฟสเคลื่อนที่เป็น 0.063 M phosphate buffer solution: 2-propanol (97:3) อัตราการไหลเท่ากับ 0.6 mL/min ใช้เครื่องตรวจวัดเป็น UV ที่ความยาวคลื่น 214 nm และfluorescence ที่ความยาวคลื่นกระตุ้น 275 nm และความยาวคลื่นคายแสง 337 nm ผลการวิจัย: วิธี HPLCUV Retention time ของ Growth hormone เท่ากับ 14.51 นาที ปริมาณตํ่าสุดของการตรวจวิเคราะห์เชิงปริมาณเท่ากับ 10 μg/ml สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของสมการเส้นตรงเท่ากับ 0.9973 วิธี HPLC-fl uorescence มีค่า Retention time เท่ากับ 14.77 นาที ปริมาณตํ่าสุดของการตรวจวิเคราะห์เชิงปริมาณเท่ากับ 1.5 μg/ml สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของสมการเส้นตรงเท่ากับ 0.9998 ทั้งสองวิธีมีความถูกต้องอยู่ในช่วง 98.10-102.49% และมีความแม่นยำภายในวันและระหว่างวันไม่เกิน 2.55% สรุปผลการวิจัย: วิธีวิเคราะห์ที่พัฒนาขึ้นมีความเป็นเส้นตรง ถูกต้อง แม่นยำ และมีความไว วิธีวิเคราะห์ด้วย HPLC-fl uorescence เพิ่มความไวในการวิเคราะห์ซึ่งใช้ความเข้มข้นของ Growth hormone ตํ่าลง
Article Details
กรณีที่ใช้บางส่วนจากผลงานของผู้อื่น ผู้นิพนธ์ต้อง ยืนยันว่าได้รับการอนุญาต (permission) ให้ใช้ผลงานบางส่วนจากผู้นิพนธ์ต้นฉบับ (Original author) เรียบร้อยแล้ว และต้องแนบเอกสารหลักฐาน ว่าได้รับการอนุญาต (permission) ประกอบมาด้วย
เอกสารอ้างอิง
Arato T, Yamaguchi T. Experience of Reviewing the Follow-on Biologics Including Somatropin and Erythropoietin in Japan. Biologicals 2011; 39(5):289–92.
British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia 2013. London: The stationery offi ce; 2013.
Catai JR, Toraño JS, Jongen PM, Jong GD, Somsen GW. Analysis of Recombinant Human Growth Hormone by Capillary Electrophoresis with Bilayer-Coated Capillaries Using UV and MS Detection. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2007; 852:160–66.
Charrier J, Martal J. Growth hormones. 1. Polymorphism. (Minireview). Reprod Nutr Dev 1988; 28(4A): 857-887.
Cholewinski M, Lückel B, Horn H. Degradation Pathways, Analytical Characterization and Formulation Strategies of a Peptide and a Protein. Calcitonine and Human Growth Hormone in Comparison. Pharm
Acta Helv 1996; 71:405–19.
Girard M, Mousseau N. Analysis of Human Growth Hormone by Hydrophobic Interaction HPLC. Method Development, Validation, and Comparative Selectivity to Reversed Phase HPLC. J Liq Chromatogr Relat Technol 1999; 22(8):1103-1116.
Haselberg R, Brinks V, Hawe A, Jong GD, Somsen GW. Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry Using Noncovalently Coated Capillaries for the Analysis of Biopharmaceuticals. Anal Bioanal Chem 2011; 400:295–303.
Hong P, Koza S, Bouvier ES. A Review Size-Exclusion Chromatography for the Analysis of Protein Biotherapeutics and Their Aggregates. J Liq Chromatogr Relat Technol 2012; 35:2923-2950.
Lacy CF, Armstrong LL, Goldman MP, Lance LL. Drug Information Handbook with International Trade Name Index. 19th ed. Edited by American Pharmacists Association. Hudson, Ohio: Lexi-Comp; 2010-2011.
Levarski Z, Soltýsová A, Krahulec J, Stuchlík S, Turňa J. High-Level Expression and Purification of Recombinant Human Growth Hormone Produced in Soluble Form in Escherichia Coli. Protein Expres
Purif 2014; 100:40–47.
Mulinacci F, Poirier E, Capelle MA, Gurny R, Arvinte T. Influence of Methionine Oxidation on the Aggregation of Recombinant Human Growth Hormone. Eur J Pharm Biopharm 2013; 85:42–52.
The United States Pharmacopeial Convention. United State Pharmacopeia 36. Rockville: The United State Pharmacopeial Convention; 2013.
Varcheh NN, Shafaati A, Zarghi A, Aboofezeli R. Separation of Somatropin and Its Degradation Products by High-Performance Liquid Chromatography Using a Reversed-Phase Polymeric Column. Iran J Pharm Res 2004; 4:209–13.
Yilmaz B, Kadioglu Y, Meral K, Onganer Y. Determination of Human Growth Hormone in Pure and Pharmaceutical Dosage Form by Spectrofl uorometry and High Performance Liquid Chromatography.
Chem Ind Chem Eng Q 2012A; 18(3):399–405.
Yilmaz B, Kadioglu Y, Meral K, Celebi F, Onganer Y. Determination and Pharmacokinetics of Recombinant Human Growth Hormone in Rabbit Plasma by Spectrofl uorometry Method. Kafkas Univ Vet Fak Derg 2012B; 18(4):589–94.
