น้ำยาตรวจหมู่โลหิตแอนติเอชเลคติน Momordica charantia ผลิตโดยศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทย

บทคัดย่อ

บทคัดย่อ

บทนำ ศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทย ผลิตแอนติเอชเลคตินจากเมล็ด Ulex europaeus ตั้งแต่ปี ค.ศ. 1972 จนถึงปี ค.ศ. 2013 ปัจจุบันเปลี่ยนเป็นการผลิตแอนติเอชมิวรีนโมโนโคลนัล ซึ่งพบปัญหาเนื่องจากไม่สามารถตรวจสาร H ในน้ำลาย ดังนั้นผลยับยั้งการจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดง (HAI) จึงไม่ถูกต้อง จากการนำเมล็ดเมล็ดพืชท้องถิ่นชนิดอื่น ๆ มาศึกษาหาแอนติเอชแลคตินพบว่า  เมล็ดมะระขี้นก (Momordica charantia) มีแอนติเอชเลคติน ซึ่งเป็นเมล็ดพันธุ์ที่สามารถหาซื้อได้ตามร้านขายอุปกรณ์ทางการเกษตร วัตถุประสงค์ เพื่อหาเมล็ดพืชที่เหมาะสมมาทดแทนเมล็ด Ulex europaeus สำหรับใช้ในการผลิตแอนติเอชเลคติน วัสดุและวิธีการ นำเมล็ดพืชท้องถิ่นเจ็ดสิบห้าชนิดมาสกัดแอนติเอชเลคตินด้วยน้ำเกลือ ทดสอบน้ำสกัดจากเมล็ดพืชกับเซลล์เม็ดเลือดแดงหมู่ A, B, O และ AB ด้วยวิธีมาตรฐานหลอดทดลอง คัดเลือกน้ำสกัดจากเมล็ดพืชที่เกิดปฏิกิริยาจับกลุ่มของเม็ดเลือดแดงและทำให้เม็ดเลือดแดงแตก มาทดสอบต่อกับเซลล์เม็ดเลือดแดง Ahm, Bhm และ Ohm ถ้าน้ำสกัดจากเมล็ดพืชชนิดใดไม่เกิดปฏิกิริยาดังกล่าวแสดงว่ามีแอนติเอช พบว่าสารสกัดจากเมล็ดพืชหกชนิดประกอบด้วย Momordica charantia สี่สายพันธุ์ ได้แก่ ไซเบอร์ มดดำ โอกินาว่า มะระจีน และ ถั่วพู (Psophocarpus tetragonolobus) สองสายพันธุ์ ได้แก่ ฝักเขียวและฝักม่วง เลือกสารสกัดจากเมล็ดพืชดังกล่าวมาทดสอบหาความแรงกับเซลล์เม็ดเลือดแดง A, B, O, AB, Ahm, Bhm และ Ohm ทดสอบกับน้ำลาย (HAI) ดูดซับและอีลูชั่นด้วยความร้อน ตรวจหาความจำเพาะและความคงทน ผลการศึกษา น้ำสกัดแอนติเอชเลคติน Momordica charantia ทุกชนิดทำให้เม็ดเลือดแดงแตก น้ำสกัดเจือจางของแอนติเอช Momordica charantia ซึ่งมีความแรงที่เหมาะสม คือ ไซเบอร์ความแรง 1:64 มดดำความแรง 1:16 โอกินาว่าและมะระจีนความแรง 1:32 ผลทดสอบ HAI ของสาร H ในน้ำลาย พบว่าแอนติเอชเลคติน Momordica charantia ไซเบอร์และโอกินาว่า มีผลตรงกับแอนติเอชเลคติน Ulex europaeus ทุกตัวอย่าง แอนติเอชเลคตินทุกชนิดมีความจำเพาะเป็นไปตามทฤษฎี แอนติเอช Momordica charantia ไซเบอร์และโอกินาว่า บ่งชี้ถึงความจำเพาะเจาะจงกับแอนติเจน H การศึกษาความคงทนแสดงให้เห็นว่าแอนติเอชเลคติน Momordica charantia ไซเบอร์และโอกินาว่า มีความคงทนสำหรับ 18 เดือน แต่เดือนที่ 18 ตัวอย่างไซเบอร์มีความแรงมากกว่าตัวอย่างโอกินาว่า การดูดซับและอีลูชั่นด้วยความร้อนแสดงให้เห็นว่าน้ำสกัดจากเมล็ดพืชทั้งหกชนิดเป็นแอนติเอชจริง สรุป Momordica charantia ไซเบอร์ เหมาะสมที่สุดที่จะนำมาผลิตเป็นน้ำยาแอนติเอชเลคตินสำหรับใช้ในห้องปฏิบัติการธนาคารเลือดแทนการผลิตจาก Ulex europaeus  เนื่องจากมีความแรงสูงและมีความคงทนดี

Abstract:

Introduction: The National Blood Centre, Thai Red Cross Society, previously produced anti-H lectin from Ulex europaeus seeds from 1972 to 2013, and now produces anti-H murine monoclonal antibodies (MoAb). However, these antibodies cannot detect H substances in saliva, so the results of the hemagglutination inhibition test (HAI) are incorrect. We studied local plant seeds for anti-H lectin activities, such as bitter gourd (Momordica charantia) seed, which can be purchased at an agricultural supply store.  Objective: To explore the potential seeds for replacing Ulex europaeus to use as a source for anti-H lectin reagents production. Materials and Methods: Seventy-five plant seeds were extracted for anti-H lectins by saline extraction. Plant seeds-extracted supernatants were tested with group A, B, O, and AB red blood cells (RBCs) by the standard tube test to detect agglutination and hemolysis reaction, and then continued testing with Ahm, Bhm, and Ohm RBC and selected those with no reactions that showed anti-H activities. There are six seed extracts from four varieties of Momordica charantia (Cyber, Moddam, Okinawa, and Chinese bitter melon) and two varieties of Psophocarpus tetragonolobus (Green and Purple winged bean). The extracts from the selected plant seeds were further tested for titration with A, B, O, AB, Ahm, Bhm, and Ohm RBCs and saliva HAI, adsorption, heat elution, specificity, and stability. Results: The extracts of every anti-H lectin from Momordica charantia caused hemolysis. The suitable dilution of anti-H lectin Momordica charantia was Cyber titer 1:64, Moddam titer 1:16, and Okinawa and Chinese bitter melon titer 1:32. The HAI test for H substances in saliva revealed that anti-H lectins Momordica charantia varieties Cyber and Okinawa showed the same results as anti-H lectin Ulex europaeus in all tested saliva samples. The observed specificity of each anti-H lectin corresponded to the theory. Anti-H lectins from Momordica charantia, Cyber, and Okinawa showed specificity to the H antigen. The stability study showed that anti-H lectins from Momordica charantia Cyber and Okinawa remained stable for 18 months, but the 18^th-month Cyber sample was more potent than the Okinawa sample. Adsorption and heat elution showed that six plant seed extracts are truly anti-H. Conclusion: Momordica charantia Cyber is the most suitable source for producing anti-H lectin reagents for use in blood bank laboratories due to its high titration and good stability.