Assessment of platelet product quality by Wright’s stain platelet smear

Abstract

Abstract:

Introduction: Platelet has a discoid shape and changes its shape upon stimulation and activation. In the past, platelet shape can be visualized by the electron microscope or phase-contrast microscope. Currently, the image from a light microscope can be further magnified by a digital camera.  We explored the utility of Wright’s stain platelet smear examined under a light microscope to evaluate the extent of shape change and compared it with pH and swirling which are the current platelet product QC tools.  Materials and Methods: We evaluated 72 platelet-rich plasma platelet (PRP-PC) products, 72 buffy coat derived platelets (BC-PC) products, and 72 apheresis platelet (AP-PC) products at day 3 of storage.  We evaluated the proportion of discoid platelet from the Wright’s stain platelet smear and compared it with pH and swirling score. Results: Wright’s stain platelet smear enables visualization of platelet shape under a light microscope and can discriminate discoid-shaped platelets from other activated shapes. BC-PC had a higher proportion of discoid platelet compared with PRP-PC and AP-PC (p < 0.05). The proportion of discoid platelets and swirling score were significantly different between platelet products of different ranges of pH (p < 0.05). The reliability of the proportion of discoid platelet is good for both intra-observer (r = 0.98) and inter-observer (r = 0.99). Conclusion: Wright’s stain platelet smear visualized under a light microscope is simple, affordable, and requires limited resources to visualize platelet shape change. The proportion of discoid platelets was correlated with the current platelet QC in blood bank. This method is an alternate tool for in-process monitoring, or the development of a better method to produce platelets.

บทคัดย่อ

บทนำ  เกล็ดเลือดซึ่งในภาวะปกติมีรูปร่างเป็น discoid จะมีการเปลี่ยนแปลงรูปร่างเมื่อมีแรงกระแทกหรือมีการกระตุ้นการทำงานของเกล็ดเลือด ในอดีตการสังเกตรูปร่างเกล็ดเลือดต้องใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนหรือกล้องจุลทรรศน์เฟสคอนทราสต์ ในปัจจุบันมีการพัฒนาการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงที่สามารถขยายวัตถุได้มากขึ้นเพราะมีการใช้กล้องดิจิตอลมาประกอบ การศึกษานี้ได้ทดลองใช้การย้อมสีไรท์และสังเกตรูปร่างเกล็ดเลือดที่เก็บรักษาไว้ในวันที่สามนำมาเปรียบเทียบกับวิธีการตรวจสอบคุณภาพเกล็ดเลือดที่ใช้ในงานบริการ วัสดุและวิธีการ ผู้ทำการศึกษาทำการประเมินคุณภาพเกล็ดเลือดที่ผลิตจากวิธี platelet rich plasma (PRP-PC), buffy coat method (BC-PC) และเกล็ดเลือดจากผู้บริจาครายเดียว (apheresis platelet: AP-PC) ชนิดละ 72 ถุง ณ วันที่สามของการเก็บรักษาโดยการนำสเมียร์เกล็ดเลือดที่ย้อมสีไรท์ ตรวจสอบสัดส่วนเกล็ดเลือดที่มีรูปร่างเป็น discoid เทียบกับวิธีการตรวจสอบคุณภาพเกล็ดเลือดที่ใช้ในงานบริการ คือ การตรวจสอบการเคลื่อนไหวของเกล็ดเลือดในถุงหรือ swirling และการวัด pH  ผลการศึกษา การตรวจดูสเมียร์เกล็ดเลือดที่ย้อมสีไรท์โดยกล้องจุลทรรศน์ สามารถสังเกตเห็นรูปร่างของเกล็ดเลือดได้ว่ามีรูปร่างเป็น discoid หรือมีการเปลี่ยนรูปร่างมีแขนงยื่นออกไป เกล็ดเลือดชนิด BC-PC มีสัดส่วนเกล็ดเลือดที่ยังมีรูปร่างเป็น discoid สูงกว่า PRP-PC และ AP-PC อย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.05) และสัดส่วนเกล็ดเลือดรูปร่างเป็น discoid  และ swirling score  ที่มีค่าสูง มีความสัมพันธ์กับผลิตภัณฑ์เกล็ดเลือดที่มี pH ระดับสูง อย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.05)  การตรวจสอบรูปร่างเกล็ดเลือดโดยการย้อมสีไรท์ มีความแปรปรวนต่ำ เมื่อตรวจโดยบุคคลเดียว (r = 0.98) และระหว่างบุคคล ( r = 0.99)  สรุป การตรวจดูสเมียร์เกล็ดเลือดที่ย้อมสีไรท์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์เป็นวิธีการที่ง่าย สามารถตรวจสอบสัดส่วนการเปลี่ยนรูปร่างของเกล็ดเลือดได้มีความน่าเชื่อถือ อาจเป็นทางเลือกสำหรับใช้ตรวจสอบคุณภาพเกล็ดเลือดในการเลือกวิธีการผลิตหรือการพัฒนาระบบการผลิตได้