การประเมินความถูกต้องของน้ำยาตรวจหาเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี ในโลหิตบริจาคที่ตรวจด้วยวิธี NAT
Keywords:
Hepatitis E virus, Validation method, Blood donor screeningAbstract
บทคัดย่อ
บทนำ การตรวจคัดกรองโลหิตบริจาคในประเทศไทยเป็นไปตามมาตรฐานของ WHO คือมีการหาเชื้อซิฟิลิส ไวรัสเอชไอวี ตับอักเสบ บี และ ซี ที่สามารถติดต่อได้จากการรับเลือด บางประเทศในยุโรปมีการตรวจหาไวรัสตับอักเสบ อี ในโลหิตบริจาคเนื่องจากพบความชุกของโรคสูง จากการศึกษาเกี่ยวกับการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี ที่มากขึ้น รวมถึงพบรายงานการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี ในผู้ป่วยที่รับเลือดในประเทศไทย ศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากากาชาดไทย จึงได้ทำการศึกษาครั้งนี้ วัตถุประสงค์ เพื่อประเมินความถูกต้องของน้ำยาตรวจหาเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี ในโลหิตบริจาค โดยวิธี NAT วัสดุวิธีการ ประเมินความไว ความจำเพาะ การเกิดปฏิกิริยาข้าม และความแม่นยำ ของน้ำยา Cobas HEV test และวิเคราะห์ด้วยเครื่อง Cobas 6800 system ในตัวอย่างทั้งหมด 345 ตัวอย่าง วิเคราะห์ผลการศึกษาทางสถิติด้วยโปรแกรม SPSS ผลการศึกษา ชุดน้ำยามีความไวในการทดสอบเท่ากับ 27.3 IU/ml (95% limit of detection) และสามารถตรวจพบเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี จากตัวอย่างยืนยันผลบวก จำนวน 10 ตัวอย่าง (ร้อยละ 100) มีความจำเพาะจากการทดสอบด้วยตัวอย่างยืนยันผลลบจำนวน 65 ตัวอย่าง โดยตรวจไม่พบเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี ทั้ง 65 ตัวอย่าง (ร้อยละ 100) และทดสอบตัวอย่างผู้บริจาคโลหิต จำนวน 211 ตัวอย่าง ให้ผลเป็นลบทั้งหมด การทดสอบปฏิกิริยาข้ามด้วยตัวอย่างที่ตรวจพบเชื้อเอชไอวี ไวรัสตับอักเสบ บี และ ซี แต่ตรวจไม่พบ HEV RNA จำนวน 59 ตัวอย่าง ให้ผลเป็นลบทั้งหมด การทดสอบความแม่นยำด้วยตัวอย่างอ้างอิงที่มีค่าความเข้มข้น 60 IU/ml และ 90 IU/ml เท่ากับ 39.91 (95% CI: 39.65-40.17) และ 41.27 (95% CI: 40.87-41.70) ตามลำดับ สรุป ชุดน้ำยา Cobas HEV test มีความไว ความจำเพาะสูง มีความแม่นยำ และไม่พบการเกิดปฏิกิริยาข้าม แสดงว่าเป็นน้ำยาที่มีประสิทธิภาพดี เหมาะสมที่จะนำมาใช้ตรวจหาเชื้อไวรัสตับอักเสบ อี ในโลหิตบริจาค
Abstract:
Introduction: WHO guideline recommended that the screening of all blood donations should be mandatory for Syphilis, HIV, Hepatitis B and C virus, however HEV screening was implemented in some European counties that are the area of high prevalence. According to the increase of HEV infection and the case reports of HEV infection from blood transfusion in Thailand, the study of National Blood Centre was implemented. Objective: This study aims to evaluate the Hepatitis E reagents for donated blood screen using NAT. Material and Method: Cobas HEV test was tested on Cobas 6800 system by using 345 samples for evaluation with regard to analytical sensitivity, specificity, cross-reactivity and repeatability. Data were analyzed by SPSS. Result: The results showed that Cobas HEV test has analytical sensitivity of 27.3 IU / ml (95% Limit of detection). Additionally, the HEV RNA were detected in all 10 HEV positive samples (100%). The specificity assay was shown to be 100%, when tested with 65 confirmed negative samples and 211 prospective blood donors. The cross-reactivity assay was tested by using HIV RNA, HBV DNA and HCV RNA positive samples which HEV RNA was not detected in these 59 samples. The repeatability assay was tested with reference samples at the concentration 60 IU/ml and 90 IU/ml. The results were 39.91 (95% CI: 39.65-40.17) and 41.27 (95% CI: 40.87-41.70), respectively. Conclusion: The Cobas HEV test had high sensitivity, specificity and precision with no cross-reactivity. Therefore, this reagent was suitable for HEV RNA detection in blood donor screening.
Downloads
References
Viswanathan R, Sidhu A. Infectious hepatitis; clinical findings. Indian J Med Res. 1957;45:49.
Hussaini S, Skidmore S, Richardson P, Sherratt L, Cooper B, O’Grady J. Severe hepatitis E infection during pregnancy. J Viral Hepat. 1997;4:51-4.
Kane MA, Bradley DW, Shrestha SM, Maynard JE, Cook E, Mishra RP, et al. Epidemic non-A, non-B hepatitis in Nepal: recovery of a possible etiologic agent and transmission studies in marmosets. JAMA. 1984;252:3140-5.
Emerson SU, Purcell RH. Hepatitis E virus. Rev Med Virol. 2003;13:145-54.
Tam AW, Smith MM, Guerra ME, Huang C-C, Bradley DW, Fry KE, et al. Hepatitis E virus (HEV): molecular cloning and sequencing of the full-length viral genome. Virology. 1991;185:120-31.
Purdy MA, Harrison TJ, Jameel S, Meng X-J, Okamoto H, Van der Poel W, et al. ICTV virus taxonomy profile: Hepeviridae. J Gen virol. 2017;98:2645.
Boxall E, Herborn A, Kochethu G, Pratt G, Adams D, Ijaz S, et al. Transfusion‐transmitted hepatitis E in a ‘nonhyperendemic’country. Transfus Med. 2006;16:79-83.
Dalton HR, Kamar N, Izopet J. Hepatitis E in developed countries: current status and future perspectives. Future Microbiol. 2014;9:1361-72.
Lhomme S, Marion O, Abravanel F, Izopet J, Kamar N. Clinical manifestations, pathogenesis and treatment of hepatitis E virus infections. J Clin Med. 2020;9:331.
Kamar N, Rostaing L, Izopet J, editors. Hepatitis E virus infection in immunosuppressed patients: natural history and therapy. Semin Liver Dis: Thieme Medical; 2013.
Aggarwal R, Jameel S. Hepatitis e. Hepatology. 2011;54:2218-26.
Xia N, Zhang J, Zheng Y, Qiu Y, Ge S, Ye X, et al. Detection of hepatitis E virus on a blood donor and its infectivity to rhesus monkey. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2004;12:13-5.
Matsubayashi K, Nagaoka Y, Sakata H, Sato S, Fukai K, Kato T, et al. Transfusion‐transmitted hepatitis E caused by apparently indigenous hepatitis E virus strain in Hokkaido, Japan. Transfusion. 2004;44:934-40.
Department of Disease Control, Ministry of Public Health (Thailand) Situation of Hepatitis E in Thailand 2019. Retrieved May 13, 2020. Available from: https://ddc.moph.go.th/brc/news.php?news=13303&deptcode=brc&news_views=2117
Poovorawan Y,Theamboonlers A,Chumdermpadetsuk S,Komolmit P, Thong C. Prevalence of hepatitis E virus infection in Thailand. Ann Trop Med Parasitol. 1996;90:189-96.
Jutavijittum P, Jiviriyawat Y, Jiviriyawat W, Yousukh A, Hayashi S, Itakura H, et al.
Seroprevalence of antibody to hepatitis E virus in voluntary blood donors in Northern Thailand.
Trop Med. 2000;42:135-9.
Intharasongkroh D, Thongmee T, Sa-nguanmoo P, Klinfueng S, Duang‐in A, Wasitthankasem R, et al. Hepatitis E virus infection in Thai blood donors. Transfusion. 2019;59:1035-43.
Goel A, Vijay HJ, Katiyar H, Aggarwal R. Prevalence of hepatitis E viraemia among blood donors: a systematic review. Vox Sang. 2020;115:120-32.
Baylis SA, Blümel J, Mizusawa S, Matsubayashi K, Sakata H, Okada Y, et al. World Health Organization International Standard to harmonize assays for detection of hepatitis E virus RNA. Emerg Infect Dis. 2013;19:729-35.
Jothikumar N, Cromeans TL, Robertson BH, Meng X, Hill VR. A broadly reactive one-step real-time RT-PCR assay for rapid and sensitive detection of hepatitis E virus. J Virol Methods. 2006;131:65-71.
Bihl F, Castelli D, Marincola F, Dodd RY, Brander C. Transfusion-transmitted infections. J Transl Med. 2007;5:1-11.
Boland F, Martinez A, Pomeroy L, O'Flaherty N. Blood donor screening for hepatitis E virus in the European Union. Transfus Med Hemother. 2019;46:95-103.
Thodou V, Bremer B, Anastasiou OE, Cornberg M, Maasoumy B, Wedemeyer H. Performance of Roche qualitative HEV assay on the Cobas 6800 platform for quantitative measurement of HEV RNA. J Clin Virol. 2020;129:104525. doi: 10.1016/j.jvc.2020.104525.
Vollmer T, Knabbe C, Dreier J. Comparison of real-time PCR and antigen assays for detection of hepatitis E virus in blood donors. J Clin Microbiol. 2014;52:2150-6.
Germer JJ, Ankoudinova I, Belousov YS, Mahoney W, Dong C, Meng J, et al. Hepatitis E virus (HEV) detection and quantification by a real-time reverse transcription-PCR assay calibrated to the World Health Organization standard for HEV RNA. J Clin Microbiol. 2017;55:1478-87.
Juhl D, Baylis SA, Blümel J, Görg S, Hennig H. Seroprevalence and incidence of hepatitis E virus infection in German blood donors. Transfusion. 2014;54:49-56.
Shankar G, Fourrier MS, Grevenkamp MA, Lodge PA. Validation of the COSTIM bioassay for dendritic cell potency. J Pharm Biomed Anal. 2004;36:285-94.
