การศึกษาคุณสมบัติของ anti-I clone 1G6 ที่ผลิตด้วย human hybridoma technique

Authors

  • อุดม ติ่งต้อย National Blood Centre, Thai Red Cross Society
  • กาญจนา เอี่ยมอัมพร National Blood Centre, Thai Red Cross Society, Thailand
  • จินตนา ทับรอด National Blood Centre, Thai Red Cross Society, Thailand

Keywords:

Anti-I, Cold agglutinin disease

Abstract

บทคัดย่อ

วัตถุประสงค์ เพื่อศึกษาคุณสมบัติทางซีโรโลยีของ anti-I clone 1G6 ที่ผลิตด้วย human hybridoma technique วัสดุและวิธีการ นำน้ำเพาะเลี้ยงเซลล์จาก clone 1G6  มาทำการทดสอบตรวจหาชนิดของแอนติบอดีด้วย panel cells และ milk inhibition test ทดสอบความจำเพาะกับเม็ดเลือดแดงหมู่เลือด A, B, O, AB, Oh, Oi adult, Oi cord และหมู่เลือด A, B, O, AB ของ I adults และ i cords รวมทั้งทดสอบความแรง แบบ two fold dilution ที่อุณหภูมิ 4oC อุณหภูมิห้อง และ 37oC ผลการศึกษา การตรวจหาชนิดของแอนติบอดีกับ panel cells พบว่าให้ผลบวกทั้ง 11 เบอร์ ทั้งที่อุณหภูมิห้อง 37oC และ IAT ยังไม่สามารถสรุปได้ เมื่อทดสอบด้วยวิธี milk inhibition test พบว่า ในน้ำนมสามารถ neutralize anti-I ทดสอบกับเซลล์เม็ดเลือดแดงต่างๆ ได้ผลบวกแรง 4+ กับเซลล์ A, B, O, AB และ Oh แต่ให้ผลลบกับ Oi adult และ Oi cord ทดสอบความจำพาะกับเซลล์เม็ดเลือดแดง A, B, O และ AB ของ I adults จำนวน 12, 28, 29 และ 5 ราย ตามลำดับ ให้ผลบวกทั้งหมด และทดสอบความจำพาะกับเซลล์ A, B, O และ AB ของ i cords จำนวน 6, 6, 6 และ 1 ราย ตามลำดับ ให้ผลลบทั้งหมด นอกจากนี้เมื่อศึกษาความแรงที่อุณหภูมิต่างๆ พบว่า มีความแรง 512 ที่อุณหภูมิ 4oC  สรุป จากการทดสอบคุณสมบัติต่างๆ ของน้ำยา human monoclonal anti-I clone 1G6 พบว่าสามารถนำไปใช้ในงานวิจัยและพัฒนาองค์ความรู้ต่อไป

Abstract:

Objective: To study characteristics of the serological properties of anti-I clone 1G6 produced by human hybridoma technique. Materials and Methods: SSSSSupernatant of clone 1G6 was assayed for antibody specificity by using panel cells and milk inhibition test. Furthermore, specific tests with red blood cells A, B, O, AB, Oh, Oi adult, Oi cord, including A, B, O, AB blood group of I adults and i cords were performed. Antibody titration tests by serial two fold dilution at 4oC, room temperature and 37oC. Results: Antibody specification could not be concluded due to the results of antibody identification with all 11 numbers of panel cells were positive at room temperature, 37oC and IAT. When tested with milk inhibition test, we found that milk could neutralize anti-I. Tests with various red blood cells gave a strong positive results 4+ with cells A, B, O, AB and Oh but gave negative results with Oi adult and Oi cord. Specific tests with red blood cells A, B, O and AB of I adults, with the amount of 12, 28, 29 and 5 cases, respectively, all gave positive results. And the specific test with cells A, B, O and AB of i cords with the amount of 6, 6, 6 and 1 cases, respectively, all gave negative results. Furthermore, when antibody titration performed at different temperature, it was found that the titer of anti-I (1G6) at 4oC was 512. Conclusion: From the study characteristics of human monoclonal anti-I clone 1G6 found that it can be able to be used in research and knowledge development.

 

Downloads

Download data is not yet available.

References

1. Tippett P, Noades J, Sanger R, Race RR, Sausais L, Holman CA, et al. Further studies of the I antigen and antibody. Vox Sang. 1960;5:107-21.
2. Wiener AS, Unger LT, Cohen L, Feldman J. Type specific cold autoantibodies as a cause of acquired hemolytic anemia and hemolytic transfusion reactions: biologic test with bovine red cells. Ann. Intern. Med. 1956;44:221-40.
3. Olavesen MG, Bentley E, Mason RVF, Stephens RJ, Ragoussis J. Fine mapping of 39 ESTs on human chromosome 6p23-p25. Genomics. 1997;46:303-6.
4. Bierhuizen MFA, Mattei MG, Fukuda M. Expression of the developmental I antigen by a cloned human cDNA encoding a member of a beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase gene family. Genes Dev. 1993;7:468-78.
5. Yu LC, Lin M. Molecular genetics of the blood group I system and the regulation of I antigen expression during erythropoiesis and granulopoiesis. Curr Opin Hematol. 2011;18:421-6.
6. Yu LC, Twu YC, Chang CY, Lin M. Molecular basis of the adult i phenotype and the gene responsible for the expression of the human blood group I antigen. Blood. 2001;98:3840-5.
7. Yu LC, Twu YC, Chou ML, Reid ME, Gray AR, Moulds JM, Chang CY, Lin M. The molecular genetics of the human I locus and molecular background explain the partial association of the adult i phenotype with congenital cataracts. Blood. 2003;101:2081-8.
8. Yeh JC, Ong E, Fukuda M. Molecular cloning and expression of a novel beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase that forms core 2, core 4, and I branches. J Biol Chem. 1999;274:3215-21.
9. Cooling L. ABO, H, and Lewis blood groups and structurally related antigens. In: Fung MK, Grossman BJ, Hillyer CD, Westhoff CM, editors. Technical manual. 18th ed. Bethesda, MD: American Association of Blood Banks; 2014. p. 291-315.
10. Daniels G. Human blood groups. 3rd ed. Singapore: Markono Print Media Pte Ltd; 2013.
11. Hakomori S. Blood group ABH and Ii antigens of human erythrocytes: chemistry, polymorphism, and their developmental change. Semin Hematol. 1981;18:39-62.
12. Marsh WL. Anti-I: a cold antibody defining the Ii relationship in human red cells. Brit J Haematol. 1961;7:200-9.
13. Marsh WL, Jenkins WJ. Anti-I: a new cold antibody. Nature. 1960;188:753.
14. Hoffman R, Benz EJ, Shattil SJ, Furie B, Silberstein LE, McGlave P, et al. Hematology: basic principles and practice. 5th ed. Philadelphia: Churchill Livingstone; 2009. p. 645-57.
15. Life's Blood. Class notes: I and P blood group systems. [Internet]. 2018. [Cited 2018 May 15]; Available from: https://faculty.madisoncollege.edu/mljensen/BloodBank/lectures/i_and_p_blood_group_systems.htmArticle.
16. Kohler G, Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibodies of predefined specificity. Nature. 1975;256:495-7.
17. Tingtoy U. Production of monoclonal anti-P1 by using hybridoma technique. J Hematol Transf Med. 2017;27:11-8.
18. Tingtoy U. A review: monoclonal antisera for blood group serology. J Hematol Transf Med. 2011;21:103-12.
19. Walker PS, Hamilton JR. Identification of antibodies to red cell antigen. In: Fung MK, Grossman BJ, Hillyer CD, Westhoff CM, editors. Technical manual. 18th ed. Bethesda, MD: American Association of Blood Banks; 2014. p. 391-424.
20. Regina ML. Method 3-6. Performing a direct antiglobulin test. In: Roback JD, Combs MR,Grossman, Hillyer CD, editors. Technical manual. 16th ed. Bethesda, MD: American Association of Blood Banks; 2008. p. 908-9.
21. Marsh WL, Nichols ME, Allen FH. Inhibition of anti-I sera by human milk. Vox Sang. 1970;18:149-54.
22. Marilyn KM. Inhibition of Anti-I. In: Wallance ME, editor. Selection of procedures for problem solving. Arlington Virginia: American Association of Blood Banks; 1983. p. 115-6.
23. Regina ML. Method 3-7. Antibody titration procedure. In: Roback JD, Combs MR, Grossman, Hillyer CD, editors. Technical manual. 16th ed. Bethesda, MD: American Association of Blood Banks; 2008. p. 909-11.
24. Win N, Needs M, Rahman S, Gold P, Wards S. An unusual case of acute hemolytic transfusion reaction caused by an autoanti-I . Immunohematology. 2012;27:101-3.
25. Sthabonsawasdikan S, Suebsang C, Kumaim B, Hattirat P, Cheiwslip P. Anti-I autoimmune hemolytic anemia. Thai J Hematol Transf Med. 1995;5:267-8.
26. Cheepsattayakorn R, Chaimongkol B, Sakulwattana M, Fongsatitkul L. Anti-I as a cause of autoimmune hemolytic anemia. J Hematol Transf Med. 2010;20:263-71.

Downloads

Published

2019-12-17

Issue

Vol. 29 No. 4: October-December 2019

Section

นิพนธ์ต้นฉบับ (Original article)