Detection and Segregation of Brucella abortus and Brucella melitensis in Aborted Bovine, Ovine, Caprine, Buffaloes and Camelid Fetuses by Application of Conventional and Real-time Polymerase Chain Reaction

Abstract

บทคัดย่อ

การศึกษานี้ใช้ปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ conventional และ real time ในการตรวจสอบและคัดแยกเชื้อ Brucella abortus และ Brucella melitensis ในตัวอ่อนแท้งของโค แกะ แพะ กระบือ และอูฐ ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บและขนส่งไปยังห้องปฏิบัติการทันที เพื่อทำ การสกัดจีโนมิกดีเอ็นเอ และตรวจด้วยปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ conventional และ real time ด้วยไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ Brucella abortus และ Brucella melitensis ตัวอย่างดีเอ็นเอจำนวน 3710 ตัวอย่างที่เก็บจากของเหลวในกระเพาะแท้ของตัวอ่อนที่แท้ง ทำการ วิเคราะห์ด้วย TaqMan และปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบขั้นเดียว พบว่าจำนวนตัวอย่างที่ให้ผลบวกต่อ Brucella จากตัวอย่างทั้งหมดเป็น 281/892 (31.5%) ในโค 224/810 (27.65%) ในแกะ 219/786 (27.86%) ในแพะ 199/604 (32.94%) ในกระบือ และ 201/618 (32.52%) ในอูฐ เมื่อใช้ปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ conventional และพบว่าตัวอย่างที่ให้ผลบวกต่อ B. melitensis และ B. abortus จาก ตัวอย่างทั้งหมดคิดเป็น 45/281 และ 231/281 ในโค 169/224 และ 49/224 ในแกะ 194/219 และ 22/219 ในแพะ 57/199 และ 137/199 ในกระบือ และ 51/201 และ 143/201 ในอูฐ เมื่อใช้ปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ real time ความไวและความจำเพาะของ ปฏิกิริยาพีซี อาร์ แบบ real time คิดเป็น 100% และ 100% การวิเคราะห์ทางสถิติแสดงให้เห็นความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ระหว่าง B. abortus และ B. melitensis ที่ตรวจพบในตัวอย่างที่เก็บจากของเหลวในกระเพาะแท้ของตัวอ่อนที่แท้งของโค แกะ แพะ กระบือ และอูฐ บัฟฟาโลและทารก Camelid และระหว่าง Brucella spp. ในโค กับแพะ กระบือ และอูฐ (p<0.05) ค่า CT ที่ได้จากปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ real-time มีความแตกต่างทางสถิติระหว่างโค แกะ แพะ กรบือ และอูฐสำหรับการตรวจพบ B. abortus และ B. melitensis ผลการศึกษา ชี้ให้เห็นว่าปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ real-time ให้ผลการตรวจเร็วกว่าวิธีมาตรฐานในปัจจุบัน ในการแยกและการคัดแยกเชื้อ Brucella spp.

คำสำคัญ : ตัวอ่อนแท้ง Brucella abortus Brucella melitensis ปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ conventional ปฏิกิริยาพีซีอาร์ แบบ real-time

Abstract

This present study was carried out to use conventional and real-time PCR for detection and segregation of Brucella abortus and Brucella melitensis in aborted bovine, ovine, caprine, buffalo and camel fetuses. All samples were collected and immediately transferred to laboratory, genomic DNA was extracted and the conventional and real-time PCR by specific primers for Brucella abortus and Brucella melitensis was performed. A TaqMan analysis and single-step PCR was carried out in total 3710 DNA of abomasal contents of aborted fetuses. In total, 281/892 (31.5%) bovine, 224/810 (27.65%) ovine, 219/786 (27.86%) caprine, 199/604 (32.94%) buffalo and 201/618 (32.52%) camel fetus samples gave positive results for Brucella species by conventional PCR. Moreover, 45/281 and 231/281, 169/224 and 49/224, 194/219 and 22/219, 57/199 and 137/199 and finally 51/201 and 143/201 specimens were positive for B. melitensis and B. abortus in aborted bovine, ovine, caprine, buffalo and camel fetuses by real-time PCR, respectively. The sensitivity and specificity of real-time PCR obtained 100% and 100%. Statistical analysis showed significant differences (p<0.01) between B. abortus and B. melitensis that were detected in abomasal contents of aborted bovine, ovine, caprine, buffalo and camelid fetuses and between presences of Brucella spp. in bovine with caprine, buffalo and camel aborted fetuses (p<0.05). The CT values obtained from real-time PCR had significant differences between aborted bovine, ovine, caprine, buffalo and camel fetuses for presence of B. abortus and B. melitensis. Results showed that the real-time PCR is considerably faster than current standard methods for isolation and segregation of Brucella spp.

Keywords : aborted fetuses, Brucella abortus, Brucella melitensis, conventional PCR, real-time PCR