Fas Ligand in Swamp Buffalo Oviduct during Follicular and Luteal Phases

Abstract

บทคัดย่อ

Fas ligand (FasL) และ Fas ซึ่งเป็นตัวรับของ FasL อยู่ในกลุ่มของ tumor necrosis factor (TNF) โปรตีนทั้งสองชนิดมีส่วนเกี่ยวข้องกับการทำงานของอวัยวะที่เรียกว่า immune privileged organ เช่น กระจกตา อัณฑะ และรก โดยกระตุ้นให้เกิดภาวะการเสื่อมตายของเซลล์หลายชนิด การปรากฏของระบบ Fas-FasL อาจระบุถึงสภาวะ immune privilege ที่เกิดขึ้นภายในท่อนำไข่กระบือปลัก ซึ่งเป็นอวัยวะที่เซลล์อสุจิรอดพ้นจากการทำลายของระบบภูมิคุ้มกันในระบบสืบพันธุ์เพศเมีย วัตถุประสงค์ในการศึกษานี้ต้องการตรวจหาการปรากฏของโปรตีน Fas และ FasL ด้วยวิธีอิมมูนโนฮิสโตเคมี ตรวจหาการแสดงออกของ FasL mRNA ด้วยวิธี RT-PCR และตรวจระดับการเสื่อมตายของเซลล์ด้วยวิธี TUNEL ภายในท่อนำไข่กระบือปลักซึ่งประกอบด้วย รอยต่อปีกมดลูกกับท่อนำไข่ (Uterotubal junction, UTJ)อิสธ์มัส แอมพูลลา และอินฟันดิบูลัม ในระยะฟอลลิคูลาร์ (จำนวน 5 ตัว) และลูเทียลช่วงกลาง (จำนวน 5 ตัว) ผลการศึกษาพบการปรากฏของโปรตีน Fas กระจายอยู่ทั่วไปตามแนวเยื่อบุผิวของท่อนำไข่กระบือปลักทุกส่วนและทุกระยะของวงรอบการเป็นสัด ในทางตรงกันข้ามพบการปรากฏของโปรตีน FasL อย่างชัดเจนภายในเซลล์เยื่อบุผิวของรอยต่อปีกมดลูกกับท่อนำไข่และอิสธ์มัสในระยะฟอลลิคูลาร์อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) เมื่อเปรียบเทียบกับท่อนำไข่ส่วนอื่นๆ หรือเปรียบเทียบกับระยะลูเทียลช่วงกลาง ผลการศึกษาด้วยวิธี RT-PCRพบการแสดงออกของ FasL mRNA ในเยื่อบุของท่อนำไข่ทุกส่วน แต่ระดับความเข้มในการแสดงออกในส่วนรอยต่อปีกมดลูกกับท่อนำไข่และอิสธ์มัสระยะฟอลลิคูลาร์มีความเข้มกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับท่อนำไข่ส่วนเดียวกันระยะลูเทียลช่วงกลาง และท่อนำไข่ส่วนอื่นๆ อย่างไรก็ดี ผลการตรวจสอบการเสื่อมตายของเซลล์โดยใช้วิธี TUNEL พบได้เพียงเล็กน้อยในท่อนำไข่ทุกส่วนของกระบือปลักทั้งสองระยะของวงรอบการเป็นสัด ผลการศึกษาดังกล่าวระบุว่าการแสดงออกของ Fas และ FasL ในบริเวณรอยต่อปีกมดลูกกับท่อนำไข่และอิสธ์มัสซึ่งเป็นบริเวณกักเก็บเซลล์อสุจิในระยะฟอลลิคูลาร์ เกี่ยวข้องกับการทำหน้าที่ของระบบ Fas-FasL ที่ส่งผลให้มีการรอดชีวิตของเซลล์อสุจิ และสนับสนุนสภาพของ immune privilege ที่อาจเกิดขึ้นในท่อนำไข่กระบือปลัก

คำสำคัญ: วงรอบการเป็นสัด Fas-FasL ท่อนำไข่ บริเวณกักเก็บเซลล์อสุจิ กระบือปลัก

Abstract

Fas ligand (FasL) and its receptor (Fas) are tumor necrosis factor (TNF) members which are involved in theimmune privileged organs, such as the cornea, testis and placenta, by triggering apoptosis in various cell types. Theappearance of a Fas-FasL system might specify the immune privileged status of the buffalo oviduct wherespermatozoa avoid eradication by female immune cells. The objective of this study was to scrutinize the FasL and Fasproteins by immunohistochemistry, FasL mRNA by RT-PCR and the apoptotic degrees by TUNEL analysis in theuterotubal junction (UTJ), isthmus, ampulla and infundibulum of swamp buffalo oviducts at follicular (n=5) and midluteal(n=5) phases. The Fas localization was scattered along the lining epithelium of all oviductal portions at bothestrous cycle stages, whereas the intensity of FasL immunostaining was more noticeable in the epithelial cells of UTJand isthmus at follicular phase and showed significant differences (p<0.05) compared to other segments and to themid-luteal phase. FasL mRNA expression was detected in the epithelial cells of all oviductal segments and the intenseof expression in UTJ and isthmus at follicular phase was greater than similar regions at mid-luteal phase and othersegments. However, the TUNEL-apoptotic cells were rarely detected in all oviductal segments of swamp buffalo atboth phases. The present results indicate that the appearance of Fas and FasL in the UTJ and isthmus which are thesite of sperm reservoir, at follicular phase can be involved in Fas-FasL system that mediate the survival ofspermatozoa and supports the immune privilege status in the swamp buffalo oviduct.

Keywords: estrous cycle, Fas-FasL, oviduct, sperm reservoir, swamp buffalo