Molecular Characterization and Detection of Babesia canis vogeli in Asymptomatic Roaming Dogs in Chiang Mai, Thailand

Abstract

บทคัดย่อ

จุดประสงค์สำหรับการศึกษาครั้งนี้เพื่อตรวจหาเชื้อ Babesia canis โดยการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอส่วนยีน 18S rDNA เพื่อใช้ในการวินิจฉัยและตรวจสอบคุณลักษณะทางอณูชีววิทยาของ B. canis สายพันธุ์ไทย โดยใช้ไพรเมอร์ 3 ชุด คือ Babesia canis-specific primer(BcSP), Piroplasm-specific primer (PSP) และ Babesia species-specific primer (BsSP) และนำไพรเมอร์เหล่านี้มาหาความไว ผลการทดลองพบว่า ไพรเมอร์ BcSP และ PSP มีความไวสูงกว่า BsSP ถึง 50 เท่า และไพรเมอร์ทั้งสองมีความจำเพาะเจาะจงดีพอที่นำมาใช้ในการตรวจหาเชื้อนี้ในสุนัขที่ไม่มีอาการของโรค ดังนั้นสุนัข 102 ตัวในเมืองเชียงใหม่ที่ไม่แสดงอาการของโรค ถูกเก็บตัวอย่างเลือด และตรวจหาเชื้อภายใต้กล้องจุลทรรศน์และด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส โดยใช้ไพรเมอร์ BcSP and PSP ผลการศึกษาพบว่า 14 (ร้อยละ 13.72)ตัว และ 9 (ร้อยละ 8.82) ตัว ตรวจพบว่ามีเชื้อนี้อยู่ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส แต่ตรวจไม่พบเชื้อนี้ด้วยวิธีฟิล์มเลือดบาง นอกจากนี้การวิเคราะห์ด้วย phylogenetic แสดงให้เห็นว่าเชื้อ B. canis สายพันธุ์ในประเทศไทยจัดอยู่ใน subspecies B. canis vogeli ความเหมือนของลำดับนิวคลีโอไทป์ของเชื้อ B. canis สายพันธุ์ไทย (accession number JF825145) เมื่อเทียบกับเชื้อนี้จากที่อื่นๆ มีความเหมือนกับสายพันธุ์ของ จีน ญี่ปุ่น เวเนซุเอลา และ บราซิล ถึงร้อยละ 99.86 การรายงานนี้เป็นการรายงานแรกที่แสดงถึงลักษณะทางอณูชีววิทยาของเชื้อ B. canis สายพันธุ์ไทย โดยการใช้บางส่วนของยีน 18S rDNA

คำสำคัญ : ยีน 18S rDNA, Babesia canis, พยาธิในเลือด, เชียงใหม่, ประเทศไทย

Abstract

The purpose of this study is to detect Babesia canis by using 18S rDNA amplification in order to confirm thepresence of the agents and to characterize molecularly the Thai B. canis. Three sets of primers, a Babesia canis-specificprimer (BcSP), Piroplasm-specific primer (PSP) and Babesia species-specific primer (BsSP), were tested for sensitivity.The results showed that BcSP and PSP were 50 times more sensitive than BsSP. Both BcSP and PSP were specificenough to detect this parasite in asymptomatic dogs. Peripheral blood samples were collected from 102 asymptomaticdogs residing in Chiang Mai and assayed with a light microscope and PCR by using BcSP and PSP primers. As aresult, fourteen (13.72%) and nine (8.82%) peripheral blood samples were positive by PCR using BcSP and PSP,respectively. No positive samples were found from blood smears. Moreover, Phylogenetic analysis demonstrated thatThai B. canis was subspecies vogeli. Homology sequencing of the partial 18S rDNA gene of Thai B. canis vogeli(accession number JF825145) compared to other sequences from different regions was identical to that found inChina, Japan, Venezuela and Brazil with 99.86% homology. Our work represents the first molecular characterizationof Thai B. canis by using the 18S rDNA gene.

Keywords : 18S rDNA gene, Babesia canis vogeli, blood parasite, Chiang Mai, Thailand