Application of Real-time Polymerase Chain Reaction for Quantitative Detection of Chicken Infectious Anemia Virus

Abstract

บทคัดย่อ

การศึกษามีวัตถุประสงค์ในการพัฒนาวิธีเชิงปริมาณในการตรวจพบไวรัสเลือดจางติดต่อในไก่ วิธี real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) ซึ่งถูกพัฒนาเพื่อการตรวจไวรัสเลือดจางติดต่อในไก่ วิธี real-time PCR ที่พัฒนาขึ้นเป็นเทคนิคเชิงปริมาณที่มี ความรวดเร็วและเชื่อถือได้ในการตรวจหาดีเอ็นเอของไวรัสเปรียบเทียบกับวิธี PCR พื้นฐาน ค่า cut-off ที่เหมาะสม คือ รอบที่ 40 ผลการ ทดสอบแสดงให้เห็นว่า ค่า C_T ที่ 39.62 พบการเจือจางที่ 10^-9 หรือ 0.454 fg/μl หรือ 3.86x10³ DNA copies จากข้อมูลนี้แสดงว่าข้อจำกัด ของการตรวจหาไวรัสในระดับต่ำสุด คือ 0.454 fg/μl วิธี real-time PCR เป็นวิธีที่มีประโยชน์ในการศึกษาพยาธิกำเนิดและการตรวจหา ไวรัสเลือดจางติดต่อในไก่

คำสำคัญ : ไวรัสเลือดจางติดต่อในไก่, ปริมาณการตรวจพบน้อยที่สุด, วิธีเชิงปริมาณ, real-time PCR

Abstract

The present study aimed to develop a quantitative method for the detection of chicken infectious anemia virus (CIAV). A real time polymerase chain reaction (real-time PCR) was developed to determine CIAV. The developed real-time PCR was a rapid and reliable quantitative technique for CIAV DNA compared with the conventional PCR. The appropriate cut-off was at the 40^th cycle. Results indicated that the C_T value of 39.62 was shown at the 10^-9 dilution or 0.454 fg/μl or 3.86 x 10³ DNA copies. This data suggests that the limit of detection for real-time PCR is 0.454fg/μl. The quantitative real-time PCR will be useful for studying CIAV pathogenesis and determining the viral yield.

Keywords : chicken infectious anemia virus, minimal detection limit, quantitative method, real-time PCR