การตรวจ HIV-1 proviral DNA จากตัวอย่างหยดเลือดแห้งบนกระดาษกรอง เทียบกับชั้นเม็ดเลือดขาวและเลือดรวม

Abstract

เปรียบเทียบเทคนิคการตรวจหา HIV-1 proviral DNA ด้วยวิธี nested PCR จากตัวอย่างชั้นเม็ดเลือดขาว เลือดรวม และหยดเลือดแห้งบนกระดาษกรอง Whatman No.5 เพื่อใช้วินิจฉัยการติดเชื้อ HIV-1 ศึกษาหาปริมาณไวรัสน้อยที่สุดที่ตรวจพบ ความไว ความจำเพาะและความคงตัวของ HIV proviral DNA บนกระดาษกรอง ผลการศึกษาหาปริมาณไวรัสน้อยที่สุดที่สามารถตรวจได้พบว่า nested PCR สามารถตรวจพบยีน gag และ pol ตั้งแต  10 copiesขึ้นไป ผลการศึกษาความไวในกลุ่มผู้ป่วยที่ใหผ้ ล anti-HIV บวก จำนวน 65 ราย พบว่ายีน gag/pol มีความไวร้อยละ 100 (65/65 ราย)/ร้อยละ 96.9 (63/65 ราย) ด้วยดีเอ็นเอสกัดจากชั้นเม็ดเลือดขาว ร้อยละ90.8 (59/65 ราย)/ร้อยละ96.9 (55/65 ราย) ด้วยดีเอ็นเอสกัดจากเลือดรวม ร้อยละ87.7 (57/65 ราย)/ร้อยละ72.3 (47/65 ราย) ด้วยดีเอ็นเอสกัดจากหยดเลือดแห้งบนกระดาษกรอง ผลการศึกษาความจำเพาะในตัวอย่างดีเอ็นเอสกัดจากเลือดกลุ่มผู้บริจาคโลหิตที่ให้ผลลบต่อการตรวจ anti-HIV จำนวน 50 ราย พบว่ายีน gag/pol มีความจำเพาะร้อยละ100 ด้วยดีเอ็นเอสกัดจาก ชั้นเม็ดเลือดขาว เลือดรวม และหยดเลือดแห้งบนกระดาษกรอง โดยสรุปการเก็บหยดเลือดแห้งบนกระดาษกรอง Whatman No.5 สามารถประยุกต์ใช้ตรวจกรองการติดเชื้อเอชไอวี โดยผลการตรวจหายีน gag จะมีความไวสูงกว่ายีน pol ทั้งนี้ HIV proviral DNA ในหยดแห้งที่สภาวะ 4 ºซ และอุณหภูมิห้องมีความคงตัวนานมากกว่า 4 สัปดาห์ และเมื่อผ่านสภาวะจำลองการขนส่งที่อุณหภูมิ 37 ºซ 7 วัน และเก็บรักษาต่อที่ 4 ºซ อีก 1 เดือนจะมีโอกาสเกิดผลลบปลอมกับยีน gag/pol ร้อยละ 16.1 (5/31 ราย)/ ร้อยละ 12.9 (4/27 ราย) ตามลำดับ